主要功能和细节
分析类型:基于细胞(定量) 检测方法:比色法 样品类型:粘附细胞 反应对象:小鼠、大鼠、奶牛、人类
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
样品类型 贴壁细胞 -
检测类型 基于细胞(定量) -
实验步骤 多步骤标准分析 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、奶牛、人类 -
产品概述 用于鉴定粘附培养细胞中线粒体生物发生的抑制剂和激活剂。 每个试剂盒都含有足够的试剂,可以分析两个96个平板上固定的人、大鼠、小鼠或牛细胞。 该套件利用比色检测与标准平板读取器一起使用。 该试剂盒的另一个IR版本可用,它使用LI-COR®近红外IRDyes®检测-MitoBiogenesis™细胞内ELISA试剂盒(IR)( 约110216 /MS642)。
细胞内ELISA试剂盒使用定量免疫细胞化学来测量培养细胞中的蛋白质水平或翻译后修饰。 细胞被固定在96 well板中,用高度特异、特征明确的单克隆抗体检测感兴趣的靶点,并用酶标记的二级抗体定量其水平。
ab110217 MitoBiogenesis™细胞内ELISA试剂盒(ab110217/MS643)设计用于在安全筛选过程的早期测量药物对线粒体生物生成的影响。 ab110217 MitoBiogenesis™In-Cell ELISA试剂盒是一种真正的96/384孔双工分析,可在培养细胞或原代细胞中对mtDNA和nDNA编码蛋白进行比值,并且只需很少的样品制备和很少的整体步骤。
将细胞(人、大鼠或小鼠)接种在96或384孔的微孔板中,在暴露于实验化合物中进行多次细胞加倍后,在每个孔中同时测量两种线粒体蛋白质的水平。 这两个蛋白质是不同氧化磷酸化酶复合物的每个亚单位,一个蛋白质是复合体IV(COX-I)的亚单位I,该亚单位是mtDNA编码的,另一个是复合体II(SDH-a)的70kDa亚单位,该亚基是nDNA编码。 复合物IV包括几个编码在线粒体中的蛋白质,而复合物II的蛋白质完全编码在细胞核中。 或者,也可以测量总蛋白质水平。
LI-COR®、Odyssey®、Aerius®和IRDye®是LI-COR Biosciences Inc的注册商标
我们的ICE(细胞内ELISA)支持包中提供了板( ab111542型 )可以单独购买。 -
说明 -
平台 微孔板
性能
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存放说明 储存于+4°C。 请参阅协议。 -
组件 2 x 96测试 100X Triton®声波风廓线仪X-100 1 x 1.5毫升 10X阻塞缓冲器 1 x 15毫升 10X磷酸盐缓冲盐 1 x 100毫升 1X AP开发解决方案 1 x 24毫升 1X HRP开发解决方案 1 x 24毫升 200X主要抗体 1 x 0.1毫升 2500倍AP-标记二级抗体 1 x 12微升 2500X HRP标记二级抗体 1 x 12微升 400X吐温-20 1 x 2毫升 AP显影试剂 1 x 139毫克 1X Janus绿色污渍 1 x 17毫升 平板密封件 2台 -
研究领域 -
别名 MS641型 MS642型 MS643型 MS644型
图片
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Western Blot显示抗体特异性。 用一级和二级抗体探测来自人或大鼠培养细胞的总细胞蛋白(10µg)的蛋白质印迹,并用LI-COR®Odyssey®成像仪扫描。 尽管存在数千种其他蛋白质,但这两种主要单克隆抗体靶向的两种线粒体蛋白质被特异性标记和可视化。 此外,人类Rho0(mtDNA缺失)细胞中mtDNA水平的降低或氯霉素对大鼠细胞线粒体蛋白翻译的抑制都会导致COX-I蛋白的特异性降低,而核DNA编码的SDH-A则不受影响。 -
COX-I/SDH-A蛋白表达率的定量测量。 在所有细胞浓度下,未经处理的细胞中观察到线粒体DNA编码蛋白表达(COX-I)与核DNA编码线粒体蛋白表达(SDH-a)的比例一致。 因此,将COX-I水平标准化为SDH-A水平简化了数据分析,并消除了在相同细胞浓度下进行所有测试的需要。 -
免疫细胞化学显示抗体特异性。 用两种针对COX-I和SDH-A的MS643初级单克隆抗体对培养细胞进行双色免疫细胞化学标记。这两种抗体在线粒体中表现出显著的特异性共定位,与这两种蛋白质的已知线粒体表达一致。 -
氯霉素对线粒体生物生成的抑制使用MitoBiogenesis™细胞内ELISA试剂盒可以快速测定药物对线粒体蛋白翻译的IC50。 在本例中,以6000个细胞/孔接种细胞,允许在药物稀释系列中生长3倍细胞,然后在每个孔中测量COX-I和SDH-a的相对量。 在8.1µM时,氯霉素相对于核DNA编码的SDH-A蛋白合成抑制50%的mtDNA编码COX-I蛋白合成。 -
细胞在96孔或384孔板中生长到约80%的汇合处,应用药物/其他治疗来刺激细胞反应。 然后将细胞固定并渗透,有效地“冷冻”它们。 然后添加一级抗体,这些抗体与线粒体或其他亚细胞隔室内的目标结合。 孵育后,洗去未结合的第一抗体并加入第二抗体。 这些次级产物与IRDyes®或酶标签(HRP或AP)结合,用于比色分析。 冲洗掉未结合的二次产物,为比色分析添加反应缓冲液,并在适合试剂盒类型的仪器上读取信号。 » 细胞内ELISA图 PDF格式
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (19)
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