概述
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产品名称 -
亲本细胞系 原始264.7 -
有机体 鼠标 -
突变描述 使用CRISPR/Cas9实现淘汰, 纯合子:外显子1中52 bp缺失-3 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型RAW 264.7细胞系( 约275474 ) 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。)。 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 培养基: 二甲醚+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 5 细胞/mL。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行缩放。 4.在37°C培养箱中用5%CO2培养。 应每天监测培养物。 亚文化指南: •所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 •引导播种密度为2x10 5 建议使用cells/mL。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1毫升 -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 淋巴 -
单元格类型 白血病单核巨噬细胞 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 细胞周期进展的重要调节器。 参与G1逮捕。 细胞周期蛋白E-和细胞周期蛋白A-CDK2复合物的有效抑制剂。 与细胞周期蛋白型D-CDK4复合物形成复合物,参与CCND1-CDK4络合物活化的组装、稳定性和调节。 作为细胞周期蛋白型D-CDK4复合物的抑制剂或激活剂,取决于其磷酸化状态和/或计量学。 -
组织特异性 在所有受试组织中表达。 骨骼肌中含量最高,肝脏和肾脏最低。 -
疾病相关 CDKN1B缺陷是多发性内分泌肿瘤4型(MEN4)的原因[MIM:610755]。 多发性内分泌腺瘤(MEN)综合征是甲状腺的遗传性癌症综合征。 MEN4是一种MEN1和MEN2表型重叠的MEN样综合征。 -
序列相似性 属于CDI家族。 -
结构域 仅包含AA 28-79的肽序列保留了大量Kip1细胞周期蛋白A/CDK2抑制活性。 -
翻译后修饰 磷酸化; 丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基发生磷酸化。 Ser-10上的磷酸化是静息细胞磷酸化的主要部位,发生在G(0)-G(1)期,导致蛋白质稳定。 有丝分裂原、生长因子、cMYC和某些癌细胞株大大增强了其他部位的磷酸化。 细胞质中的磷酸化形式是失活的。 Thr-198上的磷酸化是与14-3-3蛋白质相互作用所必需的。 CDK2对Thr-187的磷酸化导致蛋白质泛素化和蛋白酶体降解。 酪氨酸磷酸化促进了这一过程。 PKB/AKT1的磷酸化可以被PI3K催化亚基的抑制剂LY294002抑制。 Tyr-88和Tyr-89上的磷酸化对结合CDK2没有影响,但需要结合CDK4。 G-CSF对酪氨酸残基进行去磷酸化。 泛素化; 在细胞质中由KPC复合体(由RNF123/KPC1和UBAC1/KPC2组成)和在细胞核中由SCF(SKP2)。 后者需要预先对Thr-187进行磷酸化。 泛素化; 通过含有SCF(SKP2)的类TRIM21复合物; 导致其退化。 易在溶酶体中降解。 与SNX6的相互作用促进溶酶体降解。 -
细胞定位 核心。 细胞质。 内皮细胞。 静止细胞中的细胞核和细胞质。 AKT或RSK介导的Thr-198磷酸化,结合14-3-3,易位到细胞质并促进细胞周期进展。 丝裂原激活的UHMK1在Ser-10上的磷酸化也导致向细胞质的移位和细胞周期的进展。 Ser-10上的磷酸化促进了核出口。 在Tyr-88和Tyr-89的磷酸化上转移到细胞核。 用SNX6在内体处结肠化,这导致溶酶体降解。 -
UniProt提供的信息
产品
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KO细胞裂解物 -
相关产品
应用
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图片
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所有车道: 抗p27 KIP 1抗体[EPFHCR16]( 约92741 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型RAW 264.7细胞裂解物 车道2: CDKN1B敲除RAW 264.7细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 22千帕 观察到的频带大小: 28千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗-p27 KIP 1抗体[EPFHCR16]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约92741 显示与p27 KIP 1特异性结合。 在野生型RAW 264.7细胞裂解液中28 kDa处观察到一条带,在CDKN1B敲除细胞系ab281619(敲除细胞裂解液 约282970 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CDKN1B敲除RAW 264.7细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 将印迹在TBS-T中洗涤四次,在室温下与第二抗体孵育1小时,再次洗涤四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗p27 KIP 1抗体[Y236]( 约32034 )稀释1/5000 车道1: 野生型RAW 264.7细胞裂解物 车道2: CDKN1B敲除RAW 264.7细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 22千帕 观察到的频带大小: 28千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:1/5000稀释的抗-p27 KIP 1抗体[Y236]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32034 显示与p27 KIP 1特异性结合。 在野生型RAW 264.7细胞裂解液中28 kDa处观察到一条带,在CDKN1B敲除细胞系ab281619(敲除细胞裂解液 约282970 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CDKN1B敲除RAW 264.7细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 将印迹在TBS-T中洗涤四次,在室温下与第二抗体孵育1小时,再次洗涤四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
52 bp缺失-3 bp插入外显子1
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载