概述
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产品名称 人 RAF1敲除HeLa细胞系 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子2插入2 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
新冠肺炎疫苗
靶标
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功能 参与从细胞膜向细胞核传递有丝分裂信号。 从受体到细胞核的Ras依赖性信号通路的一部分。 保护细胞免受STK3介导的凋亡。 -
组织特异性 在骨骼肌中,亚型1比亚型2更丰富。 -
疾病相关 RAF1缺陷是努南综合征5型(NS5)的病因[MIM:611553]。 努南综合征(NS)是一种以面部畸形、身材矮小、肥大、心脏异常、耳聋、运动迟缓和出血素质为特征的疾病。 这是一种遗传异质性和相对常见的综合征,估计每1000-2500名活产婴儿中就有1例发生。 RAF1缺陷是LEOPARD综合征2型(LEOPARD2)的病因[MIM:611554]。 LEOPARD综合征是一种与Noonan综合征相关的常染色体显性遗传病等位基因。 首字母缩写LEOPARD代表慢精症、心电图传导异常、眼压过高、肺动脉狭窄、生殖器异常、生长迟缓和耳聋。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 TKL Ser/Thr蛋白激酶家族。 RAF亚家族。 包含1个佛波酯/DAG型锌指。 包含1个蛋白激酶结构域。 包含1个RBD(Ras-binding)域。 -
翻译后修饰 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 Thr-269处的磷酸化增加其激酶活性。 Ser-259的磷酸化诱导与YWHAZ的相互作用并使激酶活性失活。 含有蛋白磷酸酶1、SHOC2和M-Ras/MRAS的复合物对Ser-259的去磷酸化缓解了失活,从而刺激了RAF1的活性。 -
细胞定位 细胞质。 细胞膜。 在细胞质和膜中与RGS14和BRAF进行配体化。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-Raf1抗体[EP4969]-N端( 约181115 )稀释1/20000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: RAF1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 73千Da 观察到的频带大小: 73千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约181115 在73 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约181115 western blot显示与野生型HeLa细胞中的Raf1反应。 当敲除细胞系ab264978(敲除细胞裂解物 ab257126号 )已使用。 对野生型HeLa和Raf1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约181115 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1:20000和1:20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合:在外显子2中插入2个碱基。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载