2.1. 蛋白质复合物的克隆、表达、蛋白质纯化和重组

我们使用了一种改进的pFL载体，该载体编码一种截短版本的人类SNRNP200，缺少前394个残基（残基395–2136），并且含有一个N末端，TEV-可裂解的His₁₀标签（桑托斯等。, 2012)，编码人类PRPF8的pET-M11质粒^右侧（残基1747–2016），并且含有N末端，TEV可裂解His₆标签（佩纳等。, 2008; 韦伯等。, 2011)，编码人类PRPF8的pET-M11质粒^吉咪（残基2064–2335）并含有N末端TEV-可裂解GST标签（Mozaffari-Jovin等。, 2013)和编码人类AAR2或AAR2的pFL载体^Δ环（氨基酸残基170–200被三个丝氨酸取代的AAR2），两个AAR2结构均含有N末端，TEV-cleavable His₁₀标签（桑托斯等。, 2015)，如前所述。插入物来自密码优化的合成基因。编码PRPF8 C末端片段的DNA片段（包括RH和JM结构域；PRPF8^RH-JM公司; 残基1760–2335）从密码子优化的PCR扩增prpf8型利用XhoI和NdeI（NEB）通过限制性酶克隆将合成基因克隆到pIDK供体载体中。序号200^395–2136-pFL和prpf8型^1760–2335-通过Cre-Lox重组融合pIDK并用于bacmid制备。利用EcoRI和HindIII（NEB）的限制性酶克隆技术，将编码人类AAR2残基1–364的密码优化DNA片段克隆到改良的pFL载体中，以指导AAR2的产生^1–364包含C末端His₆标签。利用BamHI和XhoI将编码人类AAR2的密码优化DNA片段克隆到pcDNA3.1（+）中限制性内切酶（NEB）指导包含N端FLAG标签的AAR2的生产。根据制造商的说明，使用QuikChange定点突变试剂盒（Stratagene）引入突变。所有结构均通过染料终止测序（Seqlab）进行验证。

纯化人SNRNP200^395–2136(8 毫克 毫升⁻¹; 桑托斯等。, 2012)，PRPF8^右侧(30 毫克 毫升⁻¹; 佩纳等。, 2008)，PRPF8^吉咪（10） 毫克 毫升⁻¹; 莫扎法里·乔文等。, 2013)，AAR2（12 毫克 毫升⁻¹; 桑托斯等。, 2015)，AAR2^Δ环(12 毫克 毫升⁻¹; 桑托斯等。, 2015)，一个SNRNP200^395–2136–PRPF8^吉咪复杂（Mozaffari-Jovin等。, 2013; 8 毫克 毫升⁻¹)和AAR2–PRPF8^右侧复合（20 毫克 毫升⁻¹; 桑托斯等。, 2015)如前所述获得。美国航空航天局2^1–364(11 毫克 毫升⁻¹)按照AAR2的描述进行生产和纯化，但省略了TEV蛋白酶切割步骤，留下了His₆标签完好无损。SNRNP200号^395–2136和PRPF8^RH-JM公司基于从Sf9细胞中的重组杆状病毒衍生的重组杆状病毒共同生产。用于纯化SNRNP200^395–2136–PRPF8^RH-JM公司复合物，细胞在再悬浮缓冲液中再悬浮[50 米M（M）Tris–HCl pH值8.0，300 米M（M）氯化钠，5%(v（v）/v（v）)甘油，1 米M（M）DTT，0.05%(v（v）/v（v）)NP40]补充EDTA-游离蛋白酶抑制剂（罗氏）和DNase I（NEB），并通过超声溶解。离心后，过滤约50个柱体积的裂解液并通过Ni–NTA珠（Qiagen）。用10柱体积的再悬浮缓冲液（含15 米M（M）咪唑。捕获的络合物用两个柱体积的含500的再悬浮缓冲液洗脱 米M（M）咪唑、TEV蛋白酶（0.5 每毫升蛋白质溶液中添加mg），并对混合物进行20倍透析 米M（M）HEPES–NaOH pH 7.5，200 米M（M）氯化钠，1 米M（M）4°C下隔夜DTT。五个柱体积的缓冲交换样品再次通过Ni–NTA珠，并收集流动。该复合物的最终浓度为7 毫克 毫升⁻¹并通过进一步纯化尺寸排除色谱法（SEC）于20年在Superdex S200 10/300列（GE Healthcare）上 米M（M）HEPES–NaOH pH 7.5，200 米M（M）氯化钠，1 米M（M）数字电视。

2.2. 分析尺寸-排除色谱法

单个蛋白质和蛋白质混合物通过分析SEC在Superdex 200 Increase PC3.2/30色谱柱（GE Healthcare）上分析 米M（M）Tris–HCl pH值7.5，250 米M（M）氯化钠，0.5 米M（M）流量为50–70时的DTT 微升 最小值⁻¹为了分析复合物的形成，蛋白质（浓度如第2.1节所述)以等摩尔比混合在60 µl大小的隔离缓冲液并培养30 冰块上的最小值。洗脱组分补充SDS-PAGE负载缓冲液，并通过SDS-PACE进行分析。

2.3. 晶体学分析

人类AAR2结晶^Δ环–PRPF8^右侧综合体已在前面描述过（桑托斯等。, 2015). 简单地说，1 µl纯化人AAR2^Δ环–PRPF8^右侧复合物浓缩至14 毫克 毫升⁻¹在20中 米M（M）Tris–HCl pH值7.5，150 米M（M）氯化钠，0.5 米M（M）DTT采用等体积的储层溶液结晶，溶液由0.1组成 M（M）HEPES pH 7.0，10%(w个/v（v）)聚乙二醇6000，5%(v（v）/v（v）)2-甲基-2,4-戊二醇。将晶体转移到补充了10%的储液罐溶液中(v（v）/v（v）)2-甲基-2,4-戊二醇和液氮闪冷。在德国柏林BESSY II储存环的光束线BL14.1、BL14.2和BL14.3上以及在德国汉堡PETRA III储存环的束线P14上收集了衍射数据（100 K和被处理XDS公司（卡布施，2010年). 该结构由分子置换具有相位器（麦考伊等。, 2007)使用链条A类人类PRPF8RH（PDB入口）的结构坐标3e9升; 佩纳等。, 2008)省略了水分子。AAR2的初始模型^Δ环通过自动建模获得子单元菲尼克斯汽车（亚当斯等。, 2010). 该模型通过交替的自动循环完成精细化使用菲尼克斯定义（黄嘌呤等。, 2012)和手动建模使用库特（埃姆斯利等。, 2010). 最终模型的质量通过摩尔概率（陈）等。, 2010). 值得注意的是，在F类_o个 − F类_c（c）地图。结构图是用PyMOL公司（薛定谔）。

3.1.晶体结构人类AAR2^Δ环–PRPF8^右侧复杂的

酵母Aar2p与Prp8p-RH和JM结构域或全长Prp8p复合物的结构已被报道（韦伯等。, 2011, 2013; 加莱伊等。, 2013). 相比之下，人类AAR2的结构与酵母同源序列只有24%的同源性(补充图S1)，其与PRPF8相互作用的结构基础尚不清楚。我们之前报道过一种人类AAR2变体的结晶，其中一个内环（残基170-200）被三个丝氨酸残基（AAR2）取代^Δ环)与PRPF8复合^右侧（桑托斯等。, 2015). 在酵母Aar2p中，相应的内环被证明阻碍结晶，是蛋白酶可裂解的，并且与Prp8p C-末端结构域的相互作用无关（Weber等。, 2011, 2013; 桑托斯等。, 2015). 这里，我们报告晶体结构人类AAR2^Δ环–第8页^右侧2.35的综合体 奥分辨率。该结构由分子置换具有相位器使用PRPF8的结构坐标^右侧（PDB条目3e9升; 佩纳等。, 2008)作为分子置换搜索模型（表1).

表1 结晶数据（桑托斯等。, 2015)和精细化 括号中的值表示最高分辨率外壳。 数据收集  波长（Ω） 1.24  温度（K） 100  “空间”组 C类2  一，b条，c（c）(Å) 145.28, 57.26, 111.23  α，β，γ(°) 90, 112.74, 90  分辨率（Ω） 99.90–2.35 (2.41–2.35)  独特的反射 34687 (2502)  完整性（%） 97.6 (95.6)  多重性 3.8 (3.9)  〈我/σ(我)〉 15.6 (1.7)  R（右）合并(我)† 0.05 (0.92)  科科斯群岛1/2‡ 99.9 (76.5) 精炼  分辨率（Ω） 48.21–2.35 (2.42–2.35)  反射总数 34678（2667）  完整性（%） 97.7 (95.7)  测试集中的反射（%） 4.96 (4.87)  R（右）工作§ 0.189 (0.347)  R（右）自由的¶ 0.235 (0.418)  ESU公司††(Å) 0.35  非对称单元的内容   蛋白质分子/残留物 2/574   水的含氧物 147  平均值B类因子（λ2)   威尔逊 55.39   蛋白质 77.81   溶剂 65.02  拉马钱德兰阴谋‡‡(%)   支持 95.58   允许 4.42   异常值 0  相对标准偏差。§§来自目标几何体   粘结长度（Ω） 0.009   粘结角度（°） 0.990   二面角（°） 115.920  PDB代码 7磅/小时 †R（右）合并(我) =对于我对给定反射的观察香港特别行政区; 〈我(香港特别行政区)〉是我观察。 CC（立方厘米）1/2= (〈我2〉 − 〈我〉2)/(〈我2〉 − 〈我〉2) +，其中是半个数据集内的平均误差（Karplus&Diederichs，2012). §R（右）工作=（适用于工作装置；否σ已应用截止值）。 ¶R（右）自由的与相同R（右）工作但根据从中排除的反射测试集计算精细化。 ††根据最大可能性。 计算公式菲尼克斯定义（黄嘌呤等。, 2012). §§根-平方偏差。

除了10个N末端残基之外，跨区域残基159–201包括内环的三个连接残基170–200的丝氨酸，内环是一个连接螺旋的环α9和α10（残基313–321）和6个AAR2的C末端残基^Δ环(补充图S1)，AAR2的所有残留物^Δ环和PRPF8^右侧可以可靠地模拟成定义明确的电子密度(补充图S2). AAR2的残留物65–71和PRPF8的2001–2008残留物^右侧由于较弱的电子密度而以低置信度建模。

尽管序列同源性低，但人类AAR2的整体结构^Δ环在AAR2中^Δ环–PRPF8^右侧复合物与酵母Aar2p非常相似^Δ环与Prp8p RH和JM域（Weber等。, 2013; 加莱伊等。, 2013; 平方根偏差2.13 330 AAR2和342 Aar2p C的236对^α原子；补充图S3). 正如之前对Aar2p的观察（韦伯等。, 2011, 2013; 加莱伊等。, 2013)，人类AAR2^Δ环展示了N末端结构域（NTD；残基10–158），主要由β-股，一股α-螺旋C末端结构域（CTD；残基202–364）和C末端不规则结构的尾部（残基365–384）（图1一).

图1 (一)晶体结构人类AAR2Δ环–PRPF8右侧复杂。本图和下图的配色方案：AAR2Δ环，橙色；PRPF8型右侧，淡蓝色；橙色虚线表示柔性回路（标记为Ser三)在连接其两个结构域的AAR2中，被AAR2中的三个丝氨酸残基取代Δ环（桑托斯等。, 2015)以及残基313和321之间的另一个较小的柔性环（标记为柔性环）。N和C端子以及β-PRPF8的手指模块右侧已标记。(b条)人PRPF8和酵母Prp8p的RH结构域与人AAR2复合物的重叠Δ环和酵母Aar2p/PRPF8吉咪（PDB条目第四章43; 加莱伊等。, 2013)分别在更大的PRPF8背景下说明人类AAR2。本图和下图的配色方案：Aar2p，栗色；项目8p右侧，深蓝色；项目8p吉咪，青色。(c（c）)人类AAR2的比较Δ环–PRPF8右侧复合物和酵母Aar2pΔ环–第8页右侧–Prp8p吉咪复杂（PDB条目4升; 韦伯等。, 2013)通过RH域的叠加。红色虚线，Aar2p（韦伯等。, 2013). (d日，e（电子）)酵母Aar2p界面区域I的特写视图Δ环–第8页右侧–Prp8p吉咪复杂(d日)和人类AAR2Δ环–PRPF8右侧复杂(e（电子）). (（f），克)酵母Aar2p界面区域II的特写视图Δ环–Prp8p右侧–Prp8p吉咪复杂(（f）)和人类AAR2Δ环–PRPF8右侧复杂(克). 在(d日–（f）)下图中相互作用的残基显示为按原子类型着色的棒状物，其中碳色为各自的蛋白质，氮为蓝色，氧为红色，硫为黄色；绿色球体是水分子，黑色虚线表示氢键或盐桥，旋转符号表示相对于(一).

在全长酵母Aar2p–Prp8p结构中（PDB条目第四章43; 加莱伊等。, 2013)，Aar2p的C末端肽结构完整，与其他几个Prp8p结构域接触。与当前人类AAR2–RH复合物结构的叠加表明，由于人类AAR2 C末端肽较短，与其他PRPF8结构域的接触可能有限。因此，酵母和人类Aar2p/AAR2的重要功能C-末端肽的差异可能暗示了AAR2在人类U5-snRNP或U4/U6-U5-tri-snRNP组装中的作用模式有所不同。

尽管这两种成分的整体结构相似，但酵母和人类Prp8p之间的蛋白质界面^右侧/PRPF8型^右侧和Aar2p/AAR2明显不同。与酵母一样，NTD缺乏与PRPF8的直接相互作用^右侧而AAR2的CTD和C端子尾部与PRPF8建立了两个接口^右侧（分别为接口I和接口II；图1一–1c（c）). 在接口I中，AAR2的边缘^Δ环CTD横向触点PRPF8^右侧（图1d日和1e（电子）). 界面II由AAR2的C末端残基366–377构建，延伸穿过凸出物下方的PRPF8 RH域β-手指模块（图1（f）和1克). 这两个界面在酵母和人类系统中埋藏了相当的表面积（界面I、399和412 Ų分别为；接口II、733和511 Ų）。

界面I以疏水接触为主，12个PRPF8中只有4个^右侧-酵母Aar2p和人类AAR2之间保守的相互作用残基，强调了相互作用的不同组织。界面I的保守核心包括AAR2的Ile225（Aar2p中的Ile189）和PRPF8的Val1874之间的相互作用^右侧（Aar2p中的Val1946）以及AAR2的Met230（AAR2中的Met195）和PRPF8的Trp1839之间^右侧（Aar2p中的Trp1911）（图1d日和1e（电子）;补充图S1). 与酵母Aar2p相比，AAR2 CTD具有两个延伸螺旋(α11和α12;补充图S3). 此外，Ile225和Met230沿α5螺旋与酵母Aar2p中的等效残基进行比较（图1d日和1e（电子）)导致人类AAR2的角度明显不同^Δ环与酵母Aar2p相比，接触PRPF8 RH结构域^Δ环在Aar2p中^Δ环–Prp8p^右侧–Prp8p^吉咪复杂（图1c（c）). 此外，AAR2^Δ环参与界面II的残基在酵母和人类之间仅部分保守（八个残基中的两个；补充图S1).

3.2. 人类和酵母中AAR2–PRPF8–SNRNP200和Aar2p–Prp8p–Brr2p相互作用的相似性和差异性

AAR2的保守性较低，与PRPF8的界面存在显著差异^右侧对AAR2功能和剪接体内的相互作用有明显影响。测试AAR2之间特定接触的重要性^Δ环和PRPF8^右侧在我们的共晶结构，我们对野生型（WT）蛋白和变体进行了SEC分析。为此，我们研究了WT AAR2与WT PRPF8的结合^右侧在之前的工作中，此处仅显示用于比较（图2一–2c（c）; 桑托斯等。, 2015). 在酵母中，Aar2p的C末端尾部对Prp8是不必要的^右侧装订（韦伯等。, 2011). 相反，在人类系统中，AAR2^1–364缺少C末端尾部，不再与PRPF8稳定结合^右侧（图2一–2d日). 同样，转换PRPF8的Trp1839^右侧或AAR2的Met230，其是界面I的保守核心的一部分，单独到丙氨酸残基消除了复合物的形成（图2e（电子）和2（f）). 同样，酵母的情况不同，其中只有Prp8p的Trp1911^右侧（相当于人类PRPF8中的Trp1839^右侧)，但不是Aar2p的Met195（相当于人类AAR2中的Met230），对交互至关重要（韦伯等。, 2013).

图2 探测AAR2中的相互作用区域和残基Δ环–PRPF8右侧(一–小时)SDS-PAGE分析（左）和UV洗脱曲线（右）尺寸排除色谱法运行监测AAR2变体、PRPF8之间的相互作用右侧变体和PRPF8吉咪(一)–(c（c）)改编自桑托斯等。(2015)显示和以进行比较。车道M，分子质量标准（kDa）；通道I，输入样本。蛋白质带位于右侧。凝胶和剖面图顶部显示了洗脱馏分；洗脱体积显示在剖面图的底部。图标在底部解释。变量显示在相应图标下方。用透明图标标记的峰值代表各自蛋白质的过量。

AAR2–PRP8的低序列保守性和由此产生的结构差异^右侧界面也可能对AAR2周围更广泛的蛋白质相互作用网络产生影响。酵母中Aar2p与Prp8p RH和JM结构域的同时结合将JM结构区隔离，防止Brr2p RNA解旋酶与Aar2p-pre-U5 snRNP结合（Weber等。, 2013; 加莱伊等。, 2013). 酵母中的Aar2p–Prp8p复合物（Weber等。, 2011, 2013; 加莱伊等。, 2013)，Aar2p的C端尾部沿着突出的Prp8p延伸^右侧 β-手指模块，架线β-手指和中央Prp8p^吉咪 β-将片状物形成一个延伸的分子间β-结构（图1b条和1c（c）).

而人类AAR2中C末端尾部的开始^Δ环与PRPF8保持类似的互动^右侧例如在酵母中，使用Val373–Val375形成短β-PRPF8的三个氢键片^右侧，C端尾部的远端部分（Val374以外）偏离Aar2p C端尾部方向（图1b条和1c（c）). 在酵母中，倒数第二位的形成β-Aar2p链及其伴随的JM从Brr2p中的隔离完全由Aar2pC末端的一系列疏水残基介导，这些疏水残基与相邻的疏水残基是互补的β-RH和JM股（韦伯等。, 2013; 加莱伊等。, 2013). 基于结构的比对显示，AAR2、Pro378、Glu379、Gly380和Glu382的C末端残基不太可能支持β-与相应的高度保守的PRPF8残基形成薄片^右侧 β-手指和PRPF8^吉咪由于它们的空间或极性(补充图S1; 比较图1（f）和1克). 然而，我们不能排除hAAR2的C末端在全长蛋白质的背景下可能与PRPF8 JM结构域发生酵母样的相互作用。

人类AAR2的C末端尾巴^Δ环在观察到的构象中不能同时结合PRPF8^吉咪酵母中观察到的结构域。事实上，也证实了先前的研究（马利诺娃等。, 2017)，AAR2–PRPF8^右侧未稳定结合PRPF8^吉咪在分析SEC中（图2克和2小时)并未能隔离PRPF8^吉咪来自预先形成的SNRNP200^395–2136–PRPF8^吉咪复杂（图3一和3b条).

图3 探测AAR2Δ环–PRPF8–SNRNP200相互作用和AAR2磷酸化。(一–d日)SDS-PAGE分析（左）和UV洗脱曲线（右）尺寸排除色谱法运行监测AAR2、PRPF8之间的相互作用RH-JM公司和SNRNP200395–2136(一，b条)以及AAR2、PRPF8右侧，PRPF8吉咪和SNRNP200395–2136(c（c），d日). (e（电子）)AAR2区域特写Δ环–PRPF8右侧AAR2的Ser284周围Δ环酵母Aar2p中的相应区域在等效Ser253被磷酸模拟谷氨酸残基（Weber等。, 2013). (（f）)SDS-PAGE分析（顶部）和UV洗脱曲线（底部）尺寸排除色谱法运行监控AAR2之间的交互S284E型和PRPF8右侧在显示SDS–PAGE凝胶和洗脱曲线的面板中，通道M包含分子质量标准（kDa），通道I包含输入样品。蛋白质带位于右侧。凝胶和剖面图顶部显示了洗脱馏分；洗脱体积显示在剖面图的底部。图标在底部进行了说明。变量显示在相应图标下方。用透明图标标记的峰值代表各自蛋白质的过量。

AAR2单独或与PRPF8复合^右侧不能稳定地与SNRNP200结合^395–2136或至SNRNP200^395–2136–PRPF8^吉咪复合物（图3c（c）和3d日). 相反，稳定的AAR2–PRPF8^RM-JM公司–SNRNP200号^395–2136混合组分后形成三元络合物（图3b条).

3.3. 守恒Aar2磷酸化在人类和酵母之间

Aar2p可以在五个位置磷酸化体内（Ser253、Thr274、Tyr328、Ser331和Thr345）和Aar2p的磷酸拟态S253D或S253E变体干扰了酵母提取物中Aar2p-Prp8p的相互作用（Weber等。, 2011). 一种磷酸类似物Aar2p的结构分析^S253E型变体表明磷酸化导致Aar2p CTD的局部构象重排，从而破坏Prp8p^右侧绑定站点（Weber等。, 2011). 基于结构的序列比对显示，人类AAR2中的Ser284与酵母Aar2p中的Ser253相对应(补充图S1; 图3e（电子）)在人类肝癌细胞（Hornbeck）中发现AAR2在Ser284处磷酸化等。, 2012). 概述酵母中的情况，AAR2^第284页磷酸化变体未能稳定结合PRPF8^右侧在分析SEC中（图3（f）). 总之，我们的相互作用研究揭示了AAR2/Aar2p区域在人类和酵母系统中与PRPF8/Prp8p RH结构域保持稳定相互作用的相对重要性的差异。此外，AAR2不会螯合PRPF8JM结构域，以间歇性地阻止SNRNP200与U5-snRNP的结合。从PRPF8置换AAR2可能涉及可逆磷酸化Ser284的AAR2。因此，在酵母和人类中，U5 snRNP组装步骤的细节明显不同。

3.4. 人类AAR2抵消PRPF8 RH域中的2级构象

中的突变prpf8型基因可导致视网膜色素变性（RP；Růzi ičková&Staněk，2017）)这是一种导致人类失明的疾病，相应的PRPF8/Prp8p变异体导致U5 snRNP组装缺陷（Malinová等。, 2017)和拼接（Mayerle&Guthrie，2016; 莫扎法里·乔文等。, 2013)在人类和酵母中。在面包酵母中，两套第8页突变等位基因，与破坏剪接第一或第二步的人类RP相关突变相对应，聚集在Prp8p RH结构域中（Grainger&Beggs，2005).

此外，人类PRPF8 RH结构域可以在突起处经历构象转换β-手指模块，具有促进第一步的一种构象和一种替代品Mg²⁺-支持剪接第二步的结合构象（谢伦伯格等。, 2013). 尽管之前报道的生化和结构证据支持这种转换，但我们对AAR2–PRPF8的警告^右侧结构可能是RHβ-手指模块与相邻的对称相关RH进行晶体接触β-手指模块。然而，最近剪接体的低温电镜结构也证实了这种构象转换，使PRPF8 RH结构域变体的一些效应合理化，并证明了在酵母和人类的剪接反应中PRPF8/Prp8p RH结构区的重复远程重新定位（Wan等。，2016年; Bertram、Agafonov、Liu等。, 2017; 严等。, 2015, 2017; 张等。, 2017; 伯特伦、阿加福诺夫、迪布科夫等。, 2017; 劳胡特等。，2016年; 加莱伊等。，2016年; 普拉什卡等。, 2017; 菲卡等。, 2017; 威尔金森等。, 2021).

我们的AAR2比较^Δ环–PRPF8^右侧带有PRPF8的结构^右侧步骤1和步骤2构象表明AAR2结合与PRPF8兼容^右侧步骤1构象，但AAR2 C末端尾部和Mg中PRPF8 RH结构域之间发生了空间位阻²⁺-结合步骤2构象（图4一–4d日). 测试AAR2是否可能阻止PRPF8的转换^右侧在步骤2构象中，我们探索了AAR2是否结合PRPF8^右侧在步骤2构象中稳定的变体（T1789P；Schellenberg等。, 2013). 的确，与WT PRPF8不同^右侧，PRPF8^{右侧，T1789P}增加Mg后，部分从AAR2中解离²⁺分析SEC中的浓度（图4e（电子）–4小时)表明PRPF8中的第2步构象^右侧与AAR2绑定不兼容。

图4 AAR2介导的PRPF8中第2步构象的阻断右侧(一–d日)AAR2的结构Δ环–PRPF8右侧复杂(一)和比较AAR2的特写视图Δ环穿过凸出物下方PRPF8 RH域的C端子尾部（棒）β-在AAR2中观察到的手指模块（表面视图）Δ环–PRPF8右侧复杂(b条)或模仿PRPF8右侧步骤1构造中的域（PDB条目4jk7型; 谢伦伯格等。, 2013) (c（c）)或在PRPF8上右侧步骤2构造中的域（PDB条目4jk7型; 谢伦伯格等。, 2013) (d日)通过RH域的叠加。黄色球体，配位Mg2+离子。AAR2 C终端与PRPF8冲突右侧第二步构象中的结构域。(e（电子）–小时)SDS-PAGE分析（左）和UV洗脱曲线（右）尺寸排除色谱法运行监测AAR2和PRPF8之间的相互作用右侧(e（电子），克)或PRPF8右侧，T1789P(（f），小时)在2 米M（M）(e、， （f）)或40 米M（M）(克，小时)氯化镁。车道M，分子质量标准（kDa）；通道I，输入样本。蛋白质带在右边被识别。洗脱馏分显示在凝胶顶部和剖面图中(e（电子）); 洗脱体积显示在剖面底部(小时). 图标在左下角解释。变量显示在相应图标下方。用透明图标标记的峰值代表各自蛋白质的过量。