Proteomic Analysis of Protective Effects of Dl-3-n-Butylphthalide against mpp + -Induced Toxicity via downregulating P53 pathway in N2A Cells

doi:10.1186/s12953-022-00199-x

.2023年1月3日；21(1):1.

doi:10.1186/s12953-022-00199-x。

Dl-3-n-丁基酞通过下调N2A细胞P53通路对mpp+诱导毒性保护作用的蛋白质组学分析

袁钊（音）¹, 张健（Jian Zhang）¹, 张一丹¹, 李书月¹, 亚高¹, 崔畅¹, 刘翔（音）¹, 雷旭², 杨国锋^三

附属公司

¹中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院老年科。
²中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院神经内科。XLDOC@126.com。
^三中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院老年科。gf_yang71@163.com。

PMID： 36597095
预防性维修识别码：项目经理C9809048
内政部： 10.1186/s12953-022-00199-x号

Dl-3-n-丁基酞通过下调N2A细胞P53通路对mpp+诱导毒性保护作用的蛋白质组学分析

袁钊（音）等。蛋白质组科学. 2023.

.2023年1月3日；21(1):1.

doi:10.1186/s12953-022-00199-x。

作者

袁钊（音）¹, 张健（Jian Zhang）¹, 张一丹¹, 李书月¹, 亚高¹, 崔畅¹, 刘翔（音）¹, 雷旭², 杨国锋^三

附属公司

¹中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院老年医学科。
²中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院神经内科。XLDOC@126.com。
^三中华人民共和国河北省石家庄市河北医科大学第二医院老年科。gf_yang71@163.com。

PMID： 36597095
预防性维修识别码：项目经理C9809048
内政部： 10.1186/s12953-022-00199-x号

摘要

背景：3-正丁基苯酞（NBP）是我国治疗急性缺血性脑卒中的重要药物。最近的研究表明，NBP不仅可以挽救帕金森病（PD）细胞模型和动物模型中多巴胺能神经元的丢失，还可以改善PD患者的运动症状。然而，保护机制尚未完全理解。P53是一种多功能蛋白，参与多种细胞过程，包括细胞凋亡、DNA修复、线粒体功能、氧化还原稳态、自噬和蛋白质聚集。在PD中，p53与各种神经退行性变相关信号结合，导致神经元丢失，提示抑制p53可能是PD治疗的一个有希望的靶点。因此，本研究旨在系统筛选NBP治疗PD的新靶点。

方法：在我们的研究中，我们构建了mpp+诱导的N2A细胞，以研究NBP在PD中的益处；采用基于TMT的LC-MS/MS测定NBP预处理的不同表达蛋白（DEPs）；在线生物信息学数据库（如DAVID、STRING和KEGG）用于分析蛋白质组数据。在通过Cytoscape进一步分析和可视化蛋白-蛋白质相互作用（PPI）后，通过western blot验证DEPs。

结果：在比较蛋白质组学实验中，共有5828个蛋白质被量化，417个蛋白质被认为是DEPs（倍变>1.5，p<0.05）。在417个DEPs中，经NBP预处理的mpp+诱导的N2A细胞中，140个上调，277个下调。KEGG通路分析表明，溶酶体、吞噬体、凋亡、内吞和铁下垂是主要富集途径。通过在PPI分析中使用MCL聚类，生成了48个聚类，随后对前3个聚类的KEGG分析表明，P53信号通路被认为是NBP治疗的主要途径。

结论：NBP显著减轻了mpp+诱导的细胞毒性。NBP的神经保护作用在一定程度上与P53信号通路有关。这些发现将加强对NBP在PD中作用机制的理解，并确定新的治疗靶点。

关键词：3-正丁基苯酞（NBP）；神经保护；P53信号通路；帕金森病；蛋白质组学；串联质量标签（TMT）。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
NBP对MPP+诱导的N2A细胞毒性的影响。(A类)用浓度为0、0.1、0.5、1、5或10μM的NBP刺激细胞24 h，用MTT法测定细胞活力。(B类)不同浓度的MPP⁺加入（0、40、100、250、500和1000μM）与N2A细胞共培养24 h，用MTT测定细胞活力。(C)用不同浓度的NBP（0、0.1、0.5、1、5或10μM）预处理细胞24 h，然后对这些细胞进行MPP处理⁺（500μM）绝缘

图2
Dl-3-n-丁基酞（NBP）保护作用的定量蛋白质组学分析。(A类)当前研究的蛋白质组学工作流程。(B类)在用mpp刺激的N2a细胞中⁺在无NBP（40μM）或有NBP（500μM）的情况下持续24小时，在三个重复中共鉴定出5829个蛋白质。用折变截断值>1.5和p值<0.05来测定DEPs，我们鉴定了417个蛋白质，并测定了增加277个蛋白质和减少140个蛋白质。(C)在三个重复的定量蛋白质组学中5829个蛋白质比率的总体分布。(天)mpp+处理组和NBP组的火山图。火山图是使用两个因素绘制的，即两组样品之间的褶皱变化（Log2）和第页通过t检验获得的值（−Log10），以显示两组样本数据的显著差异。图中的红点是显著上调的蛋白质，而绿点是下调的蛋白质。灰色圆点表示DEP不显著。(E类)DEPs比率的热图，每行代表一种蛋白质，每列代表样品与参考样品的比率，比率取log2的值

图3
DEP的本体分析。根据细胞成分（CC）、生物过程（BP）和分子功能（MF）对DEPs进行分类。我们列出了前10种富集GO途径。纵坐标表示每个分类中包含的差异蛋白质的数量，横坐标表示显著丰富的功能分类和途径

图4
DEPs的KEGG途径富集。X轴是富集分数，Y轴是KEGG途径项。节点面积与表达基因数呈正相关，节点颜色与富集分析得分呈正相关

图5
(A类)由417个DEP组成的蛋白质-蛋白质相互作用网络(B类). 边缘的颜色饱和度表示调制蛋白之间的关联的置信度得分。使用CytoHubba的MMC方法鉴定了PPI网络连接程度最高的前10个蛋白质。(C)使用Cytoscape 3.8.0可视化差异调节的簇I蛋白网络。蓝色节点表示显著下调的蛋白质，红色节点表示显著上调的蛋白质(第页 < 0.05)

图6
簇II蛋白的KEGG通路富集分析(A类). mpp中差异调节的簇II蛋白网络⁺-使用Cytoscape 3.8.0对响应NBP的刺激的N2A细胞进行可视化。蓝色节点表示簇II蛋白显著下调(第页 < 0.05). (B类)NBP治疗期间，簇III蛋白在KEGG“趋化因子信号通路”中的位置以红色显示

图7
簇III蛋白的KEGG途径富集分析。(A类)差异调节的簇III蛋白质网络。蓝色节点表示显著下调的簇III蛋白(第页 < 0.05). (B类)NBP治疗期间，簇III蛋白在KEGG“p53信号通路”中的位置以红色显示

图8
P53和Bax的Western blot分析。★:第页 < 0.05; ★★:第页 < 0.01; ★★★:第页 < 0.001

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