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.2022年11月28日；14(23):5862.
doi:10.3390/cancers14235862。

circRNF10通过miR-934/PTEN/PI3k-Akt轴调节乳腺癌的致瘤特性和自然杀伤细胞介导的细胞毒性

刘飞 1, 杨桑 2, 杨正 1, 李娜·顾 1, 蒙玲娇 1, 李子怡 1, 渔阳洞 1, 紫霜卫 1, 崔志庚 三, 美香桑 1
附属公司

circRNF10通过miR-934/PTEN/PI3k-Akt轴调节乳腺癌的致瘤特性和自然杀伤细胞介导的细胞毒性

刘飞等。 癌症（巴塞尔）. .

摘要

环状RNA（circRNA）是一种非编码RNA，在肿瘤的发生和发展中受到广泛关注。然而，circRNAs在乳腺癌中的分子机制和功能尚不清楚。在当前的研究中，我们发现在BC组织中hsa_circ_0028899（也称为circRNF10）显著降低，并且较高水平的circRNF1与良好的预后显著相关。CCK8、集落形成、Transwell、ELISA和NK细胞介导的细胞毒性试验结果表明，增加circRNF10的表达可以显著抑制BC细胞的增殖、侵袭和迁移，提高NK细胞对BC细胞的杀伤效率。根据这些生物学功能，进一步研究了circRNF10在BC细胞中的可能作用和分子机制。我们使用生物信息学预测工具来预测circRNF10结合的miRNA，这已被许多实验研究验证，包括FISH、荧光素酶报告基因分析、RIP和Western印迹。这些数据表明，circRNF10作为miR-934的分子海绵，在体外和体内进一步调节PTEN表达和PI3k/Akt/MICA信号转导以及肿瘤生长。总之，这些发现揭示了circRNF10通过海绵miR-934和抑制PI3K/Akt/MICA通路在BC中作为一个新的抗癌基因发挥作用。

关键词：NK；PTEN；乳腺癌；大约RNF10；miR-934。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
GEO数据集中七个DEC的表达谱及其结构。(A类)DEC的火山图。(B类)不列颠哥伦比亚省DEC热图。(C)CSCD数据库预测的七个DEC的基本结构和特征。
图2
图2
circRNF10的特征。(A类)源自RNF10第5和第6外显子的circRNF10的示意图以及circRNF1的Sanger测序表明存在后拼接连接。(B类)通过qRT-PCR绘制BC中circRNF10表达的小提琴图。(C)细胞周期RNF10在BC细胞中的表达水平（MCF7、MDA-MB-453、MDA-MB-231、BT-549）。实验重复了三次**第页< 0.01. (D类)通过RT-PCR证实BC细胞中存在circRNF10。使用发散引物扩增cDNA中的circRNF10，而不是gDNA。(E类)放线菌素D处理后BC细胞中circRNF10和RNF10 mRNA的相对RNA水平。实验重复了三次***第页< 0.001. (F类)用qRT-PCR分析RNase R处理的BC细胞中circRNF10和RNF10的mRNA表达。实验重复了三次***第页< 0.001. (G公司)通过FISH确定circRNF10的亚细胞定位。比例尺，10μm。
图3
图3
circRNF10与BC进展有关，抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭，并提高NK-92MI细胞对BC细胞的杀伤效率。(A类)通过FISH分析观察BC组织标本中circRNF10的水平。比例尺，50μm。(B类)生存分析表明，circRNF10表达增强显示BC患者预后良好。(C)用qRT-PCR观察转染circRNF10后BC细胞中circRNF1的水平***第页< 0.001. (D类,E类)CCK8分析表明，circRNF10的过度表达分别显著抑制BT-549和MDA-MB-231细胞的增殖**第页< 0.01. (F类)集落形成实验表明，上调BC细胞中circRNF10的表达后，细胞克隆数明显减少。比例尺，250μm*第页< 0.05, **第页< 0.01. (G公司,H（H）)Transwell分析表明，circRNF10的过表达分别抑制了BT-549和MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。比例尺，100μm**第页< 0.01, ***第页< 0.001. (我,J型)在与BT-549中过度表达circRNF10的细胞共培养后，使用LDH法检测NK-92MI细胞的细胞毒性(我)或MDA-MB-231（J）细胞，效应靶比为5:1、10:1和20:1***第页< 0.001. (K（K）,我)用ELISA法分别测定共培养过表达circRNF10 BC细胞的NK-92MI细胞上清液中IFN-γ和TNF-α的蛋白水平*第页< 0.05, **第页< 0.01. 所有实验都重复了三次。
图4
图4
circRNF10在BC细胞中充当miR-934海绵。(A类)基于TCGA数据库的DEmiRNAs火山图。(B类)DEmiRNAs和预测的靶miRNA通过文氏图的交集确定。(C)使用TCGA数据库观察到has-miR-934水平。(D类)Kaplan–Meier绘图仪数据库观察到BC患者has-miR-934表达与OS之间的关联。(E类)预测circRNF10和has-miR-934的潜在结合位点。(F类)采用荧光素酶启动子分析测定与miR-934模拟物共转染的MDA-MB-231细胞中luc-cirRNF10的荧光素酶活性。实验重复了三次*第页< 0.05. (G公司)RIP分析用于研究circRNF10和miR-934的结合。实验重复了三次*第页< 0.05. (H（H）)通过FISH分析测定了MDA-MB-231细胞中circRNF10和has-miR-934的克隆化。比例尺，10μm。
图5
图5
miR-934促进BC细胞的增殖、迁移和侵袭，降低NK-92MI细胞对BC细胞的杀伤效率。(A类)通过qRT-PCR观察miR-934在BC细胞中的表达***第页< 0.001. (B类,C)CCK8分析显示，miR-934过度表达分别显著增强MDA-MB-231和BT-549的增殖**第页< 0.01. (D类)集落形成测定表明，在MDA-MB-231和BT-549细胞中上调miR-934表达后，细胞克隆的数量显著增加。比例尺，250μm*第页<0.05时**第页< 0.01. (E类,F类)Transwell实验分析表明，miR-934的过度表达分别促进了MDA-MB-231和BT-549细胞的迁移和侵袭能力。比例尺，100μm**第页< 0.01, ***第页< 0.001. (G公司,H（H）)与BT-549（G）或MDA-MB-231中过度表达的miR-934共同培养后，使用LDH法检测NK-92MI细胞的细胞毒性(H（H）)效应靶比为5:1、10:1和20:1的细胞**第页< 0.01. (我,J型)干扰素-γ水平(我)和TNF-α(J型)ELISA法观察NK-92MI细胞上清液中与共培养过表达miR-934BC细胞的情况*第页<0.05，以及**第页< 0.01. 所有实验重复三次。
图6
图6
PTEN是miR-934的靶基因。(A类)基于TargetScan、GeneCards和TCGA数据库预测miR-934的潜在靶点。(B类)miR-934靶基因的KEGG信号通路分析。(C)根据TCGA数据库测定了1109例BC标本和113例正常标本中PTEN mRNA的表达。(D类)根据TCGA数据库测定112对BC和正常组织中PTEN的mRNA水平。(E类)通过Kaplan–Meier Plotter数据库确定PTEN表达与BC中OS之间的关联。(F类)用双荧光素酶报告物法检测联合转染含野生型或突变PTEN 3′UTR载体和miR-934模拟物或NC的荧光素ase报告物的MDA-MB-231细胞的荧光素酶报告活性**第页< 0.01. (G公司)通过Western blotting观察了circRNF10过表达系统中PTEN的蛋白水平**第页< 0.01. (H（H）)通过Western blotting检测转染miR-NC或miR-934模拟物的PTEN蛋白水平**第页< 0.01. 相关结果的未删节western blot图如图S1所示。
图7
图7
circRNF10调节miR-934以影响BC细胞的增殖、迁移和侵袭，以及NK-92MI细胞对BC细胞的杀伤效率，并可能影响PI3K-Akt途径。用circRNF10、pLC5-ciR、miR-934或NC联合转染BC细胞(A类,B类)用CCK-8和集落形成试验分别检测BC细胞的增殖。比例尺，250μm。实验重复了三次**第页< 0.01. (C,D类)细胞迁移和侵袭分别通过Transwell迁移和侵袭实验进行测定。比例尺，100μm。实验重复了三次**第页< 0.01. (E类)LDH法测定NK-92MI细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤能力。实验重复了三次*第页< 0.05. (F类,G公司)干扰素-γ蛋白水平(F类)和TNF-α(G公司)ELISA法检测NK-92MI细胞上清液中的蛋白。实验重复了三次**第页< 0.01. (H（H）)Western印迹法检测PTEN、tPI3k、pPI3k、tAKT、pAKT、MICA和β-连环蛋白的蛋白水平**第页< 0.01. (我,J型)评估肿瘤生长和肿瘤重量**第页< 0.01. 相关结果的未删节western blot图如图S1所示。
图8
图8
circRNF10通过充当miR-934海绵调节BC细胞中PTEN表达和PI3k/Akt/MICA信号，抑制BC细胞的增殖、侵袭和迁移，提高NK-92MI细胞对BC细胞的杀伤效率的可能机制。
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    1. Cardoso F.、Senkus E.、Costa A.、Papadopoulos E.、Aapro M.、Andre F.、Harbeck N.、Aguilar Lopez B.、Barrios C.H.、Bergh J.等人，第四届ESO-ESMO晚期乳腺癌国际共识指南（ABC 4）匕首。安·昂科尔。2018;29:1634–1657. doi:10.1093/annonc/mdy192。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Memczak S.、Jens M.、Elefsinioti A.、Torti F.、Krueger J.、Rybak A.、Maier L.、Mackowiak S.D.、Gregersen L.H.、Munschauer M.等。环状RNA是一大类具有调节效力的动物RNA。自然。2013;495:333–338. doi:10.1038/nature11928。-内政部-公共医学
    1. Jeck W.R.，Sharpless N.E.检测和表征环状RNA。自然生物技术。2014;32:453–461. doi:10.1038/nbt.2890。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Lasda E.，Parker R.循环RNA：形式和功能的多样性。RNA。2014;20:1829–1842. doi:10.1261/rna.047126.114。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Chen Q.，Wang H.，Li Z.，Li F.，Liang L.，Zou Y.，Shen H.，李J.，Xia Y.，Cheng Z.，等。环状RNA ACTN4通过招募YBX1启动FZD7转录促进肝内胆管癌进展。《肝素杂志》。2022;76:135–147. doi:10.1016/j.jhep.2021.08.027。-内政部-公共医学

赠款和资金

本研究由河北省卫生厅（20190088）、河北省精准医学自然科学基金重点项目（H2020206199）和河北省教育厅研究生创新能力培养资助项目资助。