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.2023年1月；34（1）：e11。
doi:10.3802/jgo.2023.34.e11。 Epub 2022年11月14日。

Circ_0075960靶向miR-202-5p/CTNND1轴，通过调节Wnt/β-catenin信号活性促进子宫内膜癌细胞的生长和迁移

燕年 # 1, 李晓荣 # 2, 马景文 1, Ting Gao公司 3, 刘丹（Dan Liu） 4
附属公司

Circ_0075960靶向miR-202-5p/CTNND1轴，通过调节Wnt/β-catenin信号活性促进子宫内膜癌细胞的生长和迁移

燕年等。 妇科肿瘤杂志. 2023年1月.

缩回

摘要

背景：子宫内膜癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一，涉及多种分子改变。在EC组织中经常观察到循环RNA（circRNA）失调，表明circRNA参与EC的发育。我们旨在研究circ_0075960在EC中的作用。

方法：应用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和western blot分析进行表达分析。采用CCK-8、EdU、集落形成、流式细胞术和伤口愈合试验进行功能分析。通过双荧光素酶报告基因实验验证了miR-202-5p与circ_0075960或CTNND1之间预测的结合关系。体内在裸鼠体内建立动物模型，验证circ0075960在肿瘤生长中的作用。

结果：在EC中，Circ_0075960和CTNND1上调，而miR-202-5p下调。在动物模型中，Circ_0075.960的敲低诱导EC细胞凋亡，抑制细胞增殖和迁移，并抑制肿瘤生长。MiR-202-5p被circ_0075960靶向，并直接与CTNND1 3’UTR结合。circ_0075960敲低或miR-202-5p富集对EC细胞增殖和迁移的抑制分别被miR-202-5 p缺失或CTNND1过度表达所逆转。Circ_0075960靶向miR-202-5p，正向调节CTNND1的表达。此外，circ_0075960敲除通过靶向miR-202-5p/CTNND1轴减弱Wnt/β-catenin信号的活性。

结论：Circ_0075960以miR-202-5p/CTNND1轴为靶点，调节Wnt/β-catenin信号活动，从而促进EC的恶性发展。

关键词：连环蛋白δ1；通告RNA_0075960；子宫内膜癌；Wnt/β-儿茶素；microRNA-202-5p。

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没有报告与本文相关的潜在利益冲突。

数字

图1
图1。Circ_0075960在EC中过度表达。（A）RT-qPCR显示Circ_0075.960在EC组织和正常组织中的相对表达。（B） RT-qPCR显示circ_0075960在EC细胞和非癌细胞中表达。（C-D）使用RNase R（E-F）确保circ_0075960的稳定性18引物。
EC，子宫内膜癌；RT-qPCR，实时定量聚合酶链反应。*p<0.05；†p<0.001；‡p<0.0001。
图2
图2。Circ_0075960敲除抑制石川和RL95-2细胞的增殖和存活。（A） 采用实时定量聚合酶链反应评价sh-circ_0075960对circ_007596表达的抑制率。（B-D）通过CCK-8实验、EdU实验和集落形成实验评价circ_0075960对细胞增殖的作用。（E-F）采用流式细胞术检测circ_0075960对细胞凋亡的作用。（G-H）western blot检测circ_0075960基因敲除后石川细胞和RL95-2细胞中切割型caspase-3和MMP2的表达水平。
*p<0.05；†p<0.01；‡p<0.001；§p<0.0001。
图3
图3。MiR-202-5p是约_0075960的目标。（A） 星基预测了circ_0075960和miR-202-5p之间的结合位点。（B） 通过RT-qPCR检测miR-202-5p模拟物的效率。（C-D）荧光素酶报告子分析用于验证miR-202-5p和circ_0075960之间的预测结合位点。（E） 用RT-qPCR检测EC组织和正常组织中MiR-202-5p的表达。（F） 采用Pearson检验分析肿瘤组织中miR-202-5p与circ_0075960的相关性。（G） 用RT-qPCR检测MiR-202-5p在人胚胎干细胞、石川细胞和RL95-2细胞中的表达。
WT，野生型；MUT，突变型；EC，子宫内膜癌；RT-qPCR，实时定量聚合酶链反应。*p<0.001；†p＜0.0001。
图4
图4。CTNND1是miR-202-5p的靶点。（A） 预测的miR-202-5p和CTNND1 3'UTR之间的结合位点来自starbase。（B-C）预测的miR-202-5p和CTNND1 3'UTR之间的结合位点通过双核糖核酸酶报告分析进行了验证。（D） RT-qPCR检测癌组织和正常组织中CTNND1的表达。（E） 肿瘤组织中miR-202-5p表达与CTNND1表达的相关性。（F） western blot检测CTNND1在EC组织和正常组织中的表达。（G） western blot检测CTNND1在人胚胎干细胞、石川细胞和RL95-2细胞中的表达。
*p<0.01；†p<0.001；‡p<0.0001。
图5
图5。Circ_0075960通过靶向miR-202-5p/CTNND1轴调节Wnt/β-catenin信号活动。（A-B）western blot检测转染sh-circ_0075960、sh-circ _0075960+抗miR-202-5p或sh-circ-0075960+CTNND1的石川细胞和RL95-2细胞中β-catenin、c-Myc和cyclinD1的蛋白水平。
*p<0.05；†p<0.01；‡p<0.001；§p<0.0001。
图6
图6。Circ_0075960基因敲除阻断了动物模型中的肿瘤发展。（A-B）显示肿瘤体积、肿瘤重量和代表性肿瘤图像以评估肿瘤生长。（C） 实时定量聚合酶链反应检测circ_0075960和miR-202-5p在切除肿瘤组织中的表达。（D） western blot检测肿瘤组织中CTNND1的表达。（E） IHC法检测切除肿瘤组织中Ki67、MMP2、CTNND1、β-catenin、c-Myc和CyclinD1的丰度。
*p<0.01；†p<0.0001。
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