Microscopic Detection of DNA Synthesis in Early Mitosis at Repetitive lacO Sequences in Human Cells

doi:10.21769/BioProtoc.4504

.2022年9月5日；12（17）：e4504。

doi:10.21769/BioProtoc.4504。

重复有丝分裂早期DNA合成的显微检测拉科人类细胞中的序列

吉田和泽（Kazumasa Yoshida）^1 2, 石本理子^三, 藤田正人^三

附属机构

¹日本福冈市福冈大学医学院细胞生物学系。
²日本福冈福冈大学高级分子医学研究所。
^三日本福冈九州大学药物科学研究生院细胞生物化学系。

PMID： 36213106
预防性维修识别码：下午9501721
内政部： 10.21769/生物协议4504

重复有丝分裂早期DNA合成的显微检测拉科人类细胞中的序列

吉田和泽（Kazumasa Yoshida）等。生物协议. 2022.

.2022年9月5日；12（17）：e4504。

doi:10.21769/BioProtoc.4504。

作者

吉田和泽（Kazumasa Yoshida）^1 2, 石本理子^三, 藤田正人^三

附属机构

¹日本福冈市福冈大学医学院细胞生物学系。
²日本福冈福冈大学高级分子医学研究所。
^三日本福冈九州大学药物科学研究生院细胞生物化学系。

PMID： 36213106
预防性维修识别码： PMC9501721型
内政部： 10.21769/生物协议4504

摘要

在人类细胞周期中，DNA的完全复制是维持基因组完整性的基本过程。复制应激干扰复制分叉的进展，导致难以复制的区域在有丝分裂开始之前一直处于低复制状态。在早期有丝分裂中，一种同源定向修复DNA合成，称为有丝分裂DNA合成（MiDAS），被触发以完成DNA复制。在这里，我们提出了一种检测人类U2OS 40-2-6细胞中MiDAS的方法拉科整合到人类染色体中的序列会引起复制应激和伴随的不完全复制拉科数组。BrdU和LacI蛋白的免疫染色用于可视化早期有丝分裂中的DNA合成和拉科阵列。该方案的建立仅使用常见的免疫染色方法即可在特定位点轻松检测MiDAS，并可用于研究其他标记有位点特异性结合蛋白的难以复制区域。

关键词：BrdU；DNA修复；DNA复制；免疫荧光；MiDAS；有丝分裂；重复DNA；复制压力。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明没有利益冲突。

数字

图2。 — **图2有丝分裂DNA合成的代表性图像拉科阵列。**
白色箭头表示LacI和BrdU的共定位。比例尺=10μm。

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