Expression of the Chemokine Receptor CCR1 in Burkitt Lymphoma Cell Lines Is Linked to the CD10-Negative Cell Phenotype and Co-Expression of the EBV Latent Genes EBNA2, LMP1, and LMP2

doi:10.3390/ijms23073434

.2022年3月22日；23(7):3434.

doi:10.3390/ijms23073434。

Burkitt淋巴瘤细胞系中趋化因子受体CCR1的表达与CD10-阴性细胞表型及EBV潜伏基因EBNA2、LMP1和LMP2的共表达有关

劳拉·兹韦尼奇¹, 斯维特兰娜·科齐列娃¹, 赞娜·鲁德维卡², 艾纳斯·莱昂西克斯², 巴勃罗·埃林·亨利克森^三, 埃琳娜·卡舒巴^三 4, 伊琳娜·科洛德纽克¹

附属公司

¹拉脱维亚里加1067里加Ratsupites街5号里加斯特拉丁斯大学微生物与病毒学研究所。
²拉脱维亚生物医学研究中心，拉脱维亚里加市Ratsupites街1号，邮编：1067。
^三瑞典斯德哥尔摩SE-171 65卡罗林斯卡研究所生物医学微生物、肿瘤和细胞生物学系。
⁴细胞转化分子机制实验室，乌克兰国家科学院RE Kavetsky实验病理学、肿瘤学和放射生物学研究所，乌克兰UA-03022基辅Vasylkivska街45号。

PMID： 35408790
预防性维修识别码：项目管理委员会8998437
DOI（操作界面）： 10.3390/ijms23073434

Burkitt淋巴瘤细胞系中趋化因子受体CCR1的表达与CD10-阴性细胞表型及EBV潜伏基因EBNA2、LMP1和LMP2的共表达有关

劳拉·兹韦尼奇等。国际分子科学杂志. 2022.

.2022年3月22日；23（7）：3434。

doi:10.3390/ijms23073434。

作者

附属公司

¹拉脱维亚里加1067里加Ratsupites街5号里加斯特拉丁斯大学微生物与病毒学研究所。
²拉脱维亚生物医学研究中心，拉脱维亚里加市Ratsupites街1号，邮编：1067。
^三瑞典斯德哥尔摩SE-171 65卡罗林斯卡研究所生物医学微生物、肿瘤和细胞生物学系。
⁴细胞转化分子机制实验室，乌克兰国家科学院RE Kavetsky实验病理学、肿瘤学和放射生物学研究所，乌克兰UA-03022基辅Vasylkivska街45号。

PMID： 35408790
预防性维修识别码：项目管理委员会8998437
DOI（操作界面）： 10.3390/ijms23073434

摘要

趋化因子及其受体调节免疫细胞的迁移和癌细胞的传播。CCR1、CCR2、CCR3和CCR5均属于单个蛋白同源簇，对相同的炎性趋化因子产生反应。我们以前报道过CCR1和CCR2B是在体外由EB病毒感染B细胞诱导产生的。EBV几乎存在于所有地方性Burkitt淋巴瘤（BL）病例中；然而，EBV在疾病发病机制中的作用尚不完全清楚。在这里，我们分析了CCR1号机组,中央控制室2,资本充足率3、和CCR5号机组在9个携带EBV和4个EBV阴性BL细胞系中，EBV DNA载量和EBV潜伏基因的表达。我们透露了CCR1号机组在两个CD10-阴性BL细胞系中高mRNA和蛋白水平表达，EBV潜伏基因EBNA2、LMP1和LMP2共同表达。低水平的中央控制室2在三个BL细胞系中发现了转录物。资本充足率3和CCR5号机组几乎无法检测到抄本。我们的数据表明，在体内，CCR1可能参与BL细胞的传播和使用限制性EBV基因表达程序选择BL细胞。

关键词：Burkitt淋巴瘤细胞系；CCR1；CCR2；CCR3；CCR5；EBV。

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利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
mRNA表达*CCR1号机组-*,*中央控制室2-*以及Burkitt淋巴瘤和淋巴母细胞系中的EBV编码基因。用实时RT-PCR测定mRNA表达水平。显示了归一化为看家基因的mRNA表达值*TBP（待定）*:*CCR1号机组*和*中央控制室2*(A类); EBV编码基因EBNA2(B)、LMP1(C类)、LMP2A（外显子1/外显子2）和LMP2B(D类)和BZLF(E类). 这个*CCR1号机组*每1000份的成绩单副本数*TBP（待定）*使用定量实时RT-PCR评估转录本(A类). 使用商用EBV Real-TM Quant试剂盒（Sacase Biotechnologies）定量每个细胞的EBV DNA拷贝数(F类). 所示为EBV阴性BL细胞系：DG75、BL41、Akata-和Mutu cl.30；潜伏期为I的携带EBV的BL细胞系：Rael、Akata+和Mutu cl.148；携带EBV的II型BL细胞系：BL41/95、BL16、Jijoye P79和Akuba；携带EBV的III型BL细胞系：Mutu cl.99和BL18。LCL是在不同EBV阴性供体PB B细胞感染EBV株B95-8后在体外建立的：LCL-1y代表经过大约1年的长期培养的LCL；LCL-1m为早期传代细胞系（培养1-2个月）；将LCL-2m细胞培养2-4个月。数据表示为两到三个独立实验的平均值；在每个实验中，样品一式三份；错误条显示SD(**G公司**)*CCR1号机组*开放式阅读框(*CCR1号机组*-ORF）转录本采用RT-duplex PCR检测。用两对引物扩增第一链cDNA模板，其中一对引物用于家政基因*GAPDH公司*和另一对侧翼*CCR1号机组*-ORF公司。显示了具有EBV潜伏期I（Mutu cl.148）、II型（BL16、BL41/95、Jijoye P79）和III型（Mutu cl.99、BL18）的I型BL细胞系和两个LCL（LCL-2mon、LCL-1year）的数据；FBS显示血清剥夺3小时后的样本（受体循环条件）。

图2
伯基特淋巴瘤细胞系的表型。CD10阳性的百分比（%）(A类)和CCR1-表示(B)用流式细胞仪分析获得细胞。分析中省略了Annexin V染色（凋亡）和自体荧光细胞。给出的数据来自至少两个独立的实验，并显示为SD的平均值(C类)使用NCBI IGBLAST工具确定IGHV与顶级生殖系基因的同源性（%）。(D类)使用细胞裂解物和特异性抗体的免疫印迹法评估II型和III型BL细胞系中EBNA2和LMP1蛋白的表达；以人β-actin蛋白作为负荷控制。Raji和Mutu III BL II型细胞系作为阳性对照（表S1）。Mutu细胞系的所有克隆都是早期传代BL细胞系的衍生物[14]。BL41是EBV阴性细胞系。一个小面板显示了细胞系BL41/95、BL16、Akuba和Raji中的EBNA2蛋白，该免疫印迹与长期暴露相同。(E类)CCR1的免疫荧光染色显示在III型BL细胞系Mutu cl.99和作为阳性对照的人类髓系组织细胞淋巴瘤细胞系U937的细胞中；在DG75中，EBV和*CCR1号机组*转录阴性的BL细胞系，未观察到CCR1免疫荧光信号。

图3
Burkitt淋巴瘤细胞系CCR1细胞表面表达分析。在诱导受体循环（剥夺血清3小时）后，使用三色流式细胞术分析细胞表面是否存在CCR1。BL18和Mutu cl.99是携带EBV的III型BL细胞系；Akuba、BL41/95和BL16是携带EBV的II型BL细胞系；Mutu cl.148是携带EBV的I型BL细胞系；LCL-1y和LCL-1m是已建立的体外LCL，分别培养了大约1年和1-2个月。点图显示用抗CD10-PE、抗CD191（CCR1）-Alexa Fluor 647和抗CD192（CCR2）-Alexa Fluor 647抗体染色的细胞；至少分析了20000个门控细胞；阈值边界为染色细胞的3.0%。从分析中排除凋亡细胞（用膜联蛋白V-Horizon V450或膜联蛋白V-PerCp-Cy5.5染色）和自体荧光细胞。抗CD192（CCR2）-Alexa Fluor 647抗体在BL细胞系和LCL的细胞表面均未检测到CCR2。直方图显示，在LCL和III型BL细胞系BL18和Mutu cl.99中，绝大多数CD191（CCR1）染色细胞（填充灰色）相对于CD192（CCR2）染色的细胞（粗体线）发生移位；在早期传代的Ⅱ型BL细胞系Akuba中，只有一小部分细胞（约8.4%）CCR1阳性。显示了两个独立实验的代表性结果。

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