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.2022年2月15日16:838621。
doi:10.3389/fnins.2022.838621。 eCollection 2022年。

抑制鞘氨醇1-磷酸受体亚型3通过调节nNOS/NO和氧化应激减轻缺血再灌注损伤时的脑损伤

范学慧 1, 陈洪平 1, 陈旭 1, 王颖菊 1, 彭其寅 1, 孟莉（Meng Li） 1, 湛滨汤 1, 蒋方超 1, 万伟 1, 宋继和 1, 李国忠 1, 狄忠 1
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抑制鞘氨醇1-磷酸受体亚型3通过调节nNOS/NO和氧化应激减轻缺血再灌注损伤时的脑损伤

范学慧等。 前神经科学. .

摘要

背景：缺血性中风是危害人类生命健康的常见病。脑缺血引发了一系列复杂的有害事件，包括兴奋毒性、炎症和细胞死亡，以及通过激活一氧化氮合酶（NOS）增加一氧化氮的生成。氧化应激在脑缺血和再灌注中起主要作用。鞘氨醇1-磷酸受体亚型3（S1PR3）是S1P的G蛋白偶联受体S1PR1-S1PR5的成员，参与体内多种生物效应，其在脑缺血和再灌注期间调节氧化应激的作用尚不清楚。

方法：选用短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）小鼠作为脑缺血再灌注（I/R）损伤模型。在tMCAO后对雄性C57/BL6小鼠进行选择性S1PR3抑制或不进行S1PR3抑制剂治疗，观察梗死体积、Nissl染色、苏木精-伊红（H&E）染色以及tMCOA后NOS蛋白、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的变化。

结果：在脑缺血再灌注模型中，抑制S1PR3可改善tMCAO后小鼠的梗死体积和神经元损伤。同样，抑制S1PR3可以减少脑缺血后NO合成酶亚型神经元NOS（nNOS）的表达，并减少NO的生成。脑缺血再灌注后，氧化应激反应增强，给予S1PR3抑制剂后，SOD含量增加，MDA含量降低，表明S1PR3在调节氧化应激反应中起重要作用。

结论：抑制S1PR3通过调节nNOS/NO和氧化应激减轻I/R损伤期间的脑损伤，为IS的临床治疗提供了潜在的新的治疗靶点和机制。

关键词：CAY-10444；S1PR3；脑缺血再灌注损伤；一氧化氮；氧化应激。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，该研究是在没有任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或金融关系的情况下进行的。

数字

图1
图1
给予S1PR3特异性拮抗剂后，tMCAO小鼠的梗死体积。（A、B）不同组脑组织TTC染色的代表性图像和统计结果(n个= 4). 比例尺=5 mm。数据表示为平均值±SEM。P（P）-值由方差分析确定，然后由Tukey确定事后（post-hoc）测试*P（P）< 0.05; ***P（P）< 0.001; ns，不显著。
图2
图2
给予S1PR3特异性拮抗剂后，tMCAO小鼠脑组织的H&E、Nissl和FJC染色。（A）给予S1PR3特异性拮抗剂后，tMCAO小鼠脑组织的H&E染色。脑组织中的真空神经膜（*）。黑色箭头指向胶质细胞，白色箭头指向神经元核，神经元核减少且呈粗面染色(→），n个= 4. 比例尺=50μm。（B）给药S1PR3特异性拮抗剂后，tMCAO小鼠脑组织的Nissl染色。黑色箭头指向尼塞尔体神经元。白色箭头指向尼塞尔体缺失的神经元，n个= 4. 比例尺=50μm。（C、D）DAPI（蓝色）/FJC（绿色）/NeuN（红色）小鼠脑组织切片tMCAO后典型免疫荧光图像及统计结果(n个= 4). 数据表示为平均值±SEM。P（P）-值由方差分析确定，然后由Tukey确定事后（post-hoc）测试**P（P）<0.01***P（P）< 0.001; ns，不显著。比例尺=100μm。
图3
图3
抑制S1PR3可减弱tMCAO后小胶质细胞和星形胶质细胞的激活。（A、B）tMCAO后小鼠脑组织切片的DAPI（蓝色）/Iba1（红色）典型免疫荧光图像和统计结果(n个= 4).（C、D）tMCAO后小鼠脑组织切片的DAPI（蓝色）/GFAP（绿色）典型免疫荧光图像和统计结果(n个= 4). 数据以平均值±SEM表示。P（P）-值由方差分析确定，然后由Tukey确定事后（post-hoc）测试*P（P）< 0.05; **P（P）<0.01***P（P）< 0.001; 和ns，不显著。比例尺=100μm。400×，比例尺=50μm。
图4
图4
抑制S1PR3可抑制I/R后nNOS的表达。（A）假手术组、24h tMCAO组、CAY10444+24h tMCOA组、V+24h t MCAO小组的Western blot，以及iNOS、nNOS和eNOS的表达。（B–D）iNOS、nNOS和eNOS蛋白的表达水平(n个= 4). 数据表示为平均值±SEM。P（P）-值由方差分析确定，然后由Tukey确定事后（post-hoc）测试**P（P）<0.01***P（P）<0.001；ns，不显著。
图5
图5
nNOS荧光图像和NO含量表达。（A、B）tMCAO后小鼠脑组织切片的DAPI（蓝色）/nNOS（绿色）代表性免疫荧光图像和统计结果。（C）测量NO生成(n个= 4). 数据表示为平均值±SEM。P（P）-值由方差分析确定，然后由Tukey确定事后（post-hoc）测试*P（P）< 0.05; **P（P）<0.01***P（P）< 0.001; ns，不显著。
图6
图6
tMCAO小鼠SOD活力和MDA含量。（A）测定SOD活力(n个= 4).（B）测定MDA含量(n个= 4). 数据表示为平均值±SEM。P（P）-数值由方差分析确定，然后是Tukey事后（post-hoc）测试*P（P）< 0.05; **P（P）<0.01***P（P）< 0.001; ns，不显著。
图7
图7
S1PR3在脑缺血和再灌注期间介导nNOS/NO和氧化应激。
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