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.2022年3月2日；63(3):3.
doi:10.1167/iovs.63.3.3。

阻塞性睡眠呼吸暂停对泪腺功能的影响

王少潘 1 2 三, 新河 1 2 4, 李庆民 5, 生张玉涵 1 2, 胡娇月 1 2 6 7, 宗荣荣 1 2, 井仪庄 4, 安德鲁·J·夸托克 8, 高莹莹 5, 魏丽 1 2 6 7, 刘祖国 1 2 6 7 三
附属公司

阻塞性睡眠呼吸暂停对泪腺功能的影响

王少潘等。 投资眼科视觉科学. .

摘要

目的：目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSA）对泪腺功能的影响及其机制。

方法：7至8周龄雄性小鼠被关在具有周期性间歇性低氧的笼子中，以模拟阻塞性睡眠呼吸暂停综合征，而对照组则保持在正常环境中。裂隙灯观察、荧光素染色和角膜敏感性检测用于评估角膜变化。用酚红棉线检测泪液分泌，用苏木精和伊红染色、油红O染色、胆固醇和甘油三酯试剂盒、免疫荧光染色、免疫组织化学染色、实时聚合酶链反应、透射电镜观察泪腺的病理变化，和Western blot。

结果：研究表明，泪液分泌减少，角膜上皮缺损和角膜过敏。泪腺内也可见肌上皮细胞损伤、脂质异常堆积、细胞增殖减少、凋亡增加和炎性细胞浸润。此外，OSA小鼠泪腺中的Hifα和NF-κB信号通路被激活，而Pparα被下调。非诺贝特治疗显著减轻阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSA）引起的泪腺病变。

结论：OSA干扰Hifα/Pparα/NF-κB信号轴，影响泪腺结构和功能，导致干眼症。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露：S.Wang，无；十、他：，无；Q.李，无；张勇，无；胡锦涛，无；R.Zong，无；庄杰，无；A.J.Quantock，无；Y.Gao、，无；李伟，无；刘总，无

数字

图1。
图1。
阻塞性睡眠呼吸暂停导致小鼠干眼改变。（A） OSA诱导方案示意图。（B） 氧气浓度在90秒周期内实时监测。（C） 不同OSA诱导时间后小鼠角膜的裂隙灯图像和荧光素染色。（D） 荧光素染色分数表明OSA小鼠角膜上皮缺损。（E） OSA小鼠角膜敏感性增加。（F） 阻塞性睡眠呼吸暂停综合症小鼠的泪液分泌减少。（G） OSA诱导小鼠一个月后泪腺重量增加。n=6（C–G）；n=10（B）*P（P）< 0.05, ****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照；AHI，呼吸暂停-低通气指数。
图2。
图2。
OSA导致泪腺脂质代谢异常。（A） 油红O染色显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺脂质沉积。（B） 相对油红O染色强度显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺脂质积聚。（C） 透射电子显微镜检查OSA泪腺腺泡细胞中的脂滴。（D） 油红O染色显示，在OSA不同持续时间后，小鼠肝脏中没有脂质积聚。阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺中胆固醇和甘油三酯水平。（G，H）血清中的胆固醇和甘油三酯水平。（一） 基因表达Pparα、Cpt11a、Fas、，和抄送36阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺。（J） Western blot结果显示PPARα和CPT1A的蛋白表达。PPARα（K）和CPT1A（L）的Western blot定量分析。n=6（A–D，I–L）；n=7（E和F）；n=8（G和H）*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001, ****P（P）< 0.0001.比例尺：100µm（A和D）；5µm（C）。D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图3。
图3。
OSA影响泪腺线粒体的形态和转定位酶的表达。（A） TIM23的免疫荧光染色(红色)和DAPI(蓝色)泪腺。（B） TIM23的平均荧光强度表明阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺线粒体内膜蛋白的表达降低。（C） TOM20的免疫荧光染色(红色)和DAPI(蓝色)。（D） TOM20的平均荧光强度表明阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺线粒体外膜蛋白表达降低。（E） 透射电镜显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺线粒体微结构改变。n=6（A–E）*P（P）< 0.05.比例尺：20µm（A和C）；1µm（E）。D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图4。
图4。
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSA）会导致阻塞性睡眠暂停综合征泪腺发炎。（A） 苏木精和伊红染色显示OSA泪腺细胞浸润。黑色箭头代表细胞浸润。（B） 免疫组织化学染色显示CD4 T淋巴细胞。黑色箭头代表阳性染色区域。（C） CD45的免疫荧光染色(绿色)显示白细胞的分布(蓝色，DAPI）。（D） F4/80免疫荧光染色(绿色)显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺中的巨噬细胞(蓝色，DAPI）。（E） 免疫组织化学评分显示CD4阳性细胞增加。图表显示了CD45（F）和F4/80（G）染色阳性细胞的特定计数。（H） qRT-PCR确定伊尔6,Il10号机组,Il1β、和Tnfα。（一） Western blot显示OSA小鼠泪腺中磷酸化P65、总P65、NRF2和SOD2的蛋白表达。（J） p-P65/P65、NRF2和SOD2的Western blot定量分析。n=5（H–J）；n=6（A–G）。比例尺：100µm（A和B）；40µm（C和D）*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）＜0.001****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图5。
图5。
OSA影响OSA泪腺的增殖、凋亡和肌上皮细胞结构。（A） αSMA免疫荧光染色显示肌上皮细胞的分布。（B） Ki67的免疫荧光染色(红色)表明OSA泪腺细胞增殖(蓝色，DAPI）。（C） TUNEL染色（绿色）确定阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺（蓝色，DAPI）中的凋亡细胞。（D） αSMA免疫荧光染色定量显示肌上皮细胞表达降低。（E） qRT-PCR显示Ki67的表达减少。（F） 图中显示了TUNEL染色阳性细胞的特定计数。n=6（A-F）。比例尺：40µm（A–C）*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图6。
图6。
OSA诱导OSA泪腺缺氧诱导因子的变化。（A，C）不同时间点HIF1α和HIF2α激活的免疫组织化学染色。（B，D）qRT-PCR显示Hif1α和Hif2α阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺。（E） Western blot分析表明HIF1α和HIF2α的蛋白表达水平发生变化。HIF1α和HIF2α的（F，G）Western blot定量分析。n=5（A–G）。比例尺：100µm*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001, ****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图7。
图7。
非诺贝特逆转阻塞性睡眠呼吸暂停综合征引起的泪腺病理变化。（A） 裂隙灯图像显示非诺贝特治疗后OSA诱导的角膜上皮缺损得到改善。（B） 通过荧光素染色评分确定角膜上皮缺损的减少。（C） 非诺贝特治疗一个月后，角膜敏感度恢复到正常水平。（D） 油红O染色显示非诺贝特治疗后OSA泪腺脂质分布减少。（E） 透射电子显微镜鉴定OSA泪腺腺泡细胞中的脂质沉积。（F） 非诺贝特治疗后泪液分泌值增加。（G） 油红O染色定量显示非诺贝特治疗后泪腺脂质减少。（H） 非诺贝特可以改善泪腺中的胆固醇和（I）甘油三酯水平。（J） 基因表达水平Pparα、Cpt1α、Fas和抄送36非诺贝特治疗后症状有所改善。（K） TOM20的免疫荧光染色(红色)在一个月的阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺中减少，但用非诺贝特治疗后仍保持不变。（五十） TOM20的荧光定量证实了这一变化。（M） 时间23(红色)一个月阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者泪腺的免疫染色减少，而非诺贝特治疗后免疫染色基本保持不变。（N） 荧光定量显示TIM23的回收率。（O） 透射电子显微镜显示喂食非诺贝特的小鼠线粒体的形态更加完整。n=6（A–J）；n=8（K–n）。比例尺：100µm（D）；20微米（J）；5µm（E）；1µm（N）*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001, ****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图8。
图8。
非诺贝特改善OSA诱导的炎症和细胞凋亡。（A） 泪腺苏木精和伊红染色显示细胞浸润(黑色箭头)。（B） 浸润细胞计数显示，非诺贝特治疗后细胞浸润减少。（C） CD4免疫染色显示泪腺组织中T淋巴细胞呈阳性。（D） CD4免疫组化评分显示非诺贝特治疗后CD4阳性染色减少。（E） 非诺贝特治疗后，阻塞性睡眠呼吸暂停综合征泪腺中CD45阳性白细胞显著减少。（F） CD45的免疫荧光强度证实了这一变化。（G） F4/80阳性巨噬细胞表现出与CD45相似的模式。（H） F4/80染色的定量分析也证实非诺贝特治疗后巨噬细胞浸润减少。（I，J）免疫荧光染色和Ki67的RT-qCR显示泪腺细胞增殖。（K） TUNEL染色显示，治疗后泪腺凋亡细胞减少。（五十） TUNEL染色定量显示凋亡细胞的强度，治疗后细胞凋亡强度降低。（M） Western印迹分析表明OSA小鼠泪腺中总P65、磷酸化P65、NRF2和SOD2在治疗后的变化。（N） p-P65/P65、NRF2和SOD2的Western blot定量分析。n=5（I，J，M，n）；n=6（A–H，K–L）。比例尺：100µm（A和C）；40µm（E、G、I和K）*P（P）<0 .05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001, ****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图9。
图9。
非诺贝特可恢复肌上皮细胞结构并增强低氧诱导因子的表达。（A） αSMA的免疫荧光染色表明肌上皮细胞的表达。（B） α-SMA染色定量显示，OSA诱导一个月后荧光强度降低，非诺贝特治疗后未见这种变化。HIF1α和HIF2α的（C，E）免疫组织化学染色显示非诺贝特治疗后HIF2β的表达增加。（D，F）qRT-PCR显示Hif1α和Hif2α非诺贝特治疗后增加。n=6（A–F）。比例尺：40微米（A）；100µm（C和E）*P（P）< 0 .05, ****P（P）< 0.0001. D、 天；M、 月份；NC，阴性对照。
图10。
图10。
建议的模型Hifα/PparαOSA诱导的信号轴（A）和泪腺功能变化的流程（B）。慢性间歇性缺氧导致Hifα泪腺细胞表达。Hifα然后转移到细胞核中，与Hifβ，并激活下游基因。Hif公司可以抑制Pparα，通过调节Fas公司通过调节Cpt1a型.上调抄送36促进泪腺对脂类的吸收。此外，Hifα可以通过以下途径直接或间接激活NF-κB信号通路PparαNF-κB信号通路的激活、细胞内脂质沉积和炎症细胞浸润有助于泪腺微环境中的炎症反应。脂质积聚和炎症可诱导ROS的产生。炎症、脂质沉积、活性氧、泪腺凋亡增加、线粒体功能障碍和肌上皮结构受损最终导致泪液分泌减少。
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