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.2022年2月26日；20(1):39.
doi:10.1186/s12958-022-00911-8。

FTO保护人类颗粒细胞免受化疗诱导的细胞毒性

王荣利 1, 王伟（音译） 2, 王丽君 1, 林南苑 1, 程飞燕 1, 新冠 1, 妮妮·郑 1, 杨新元 三
附属公司

FTO保护人类颗粒细胞免受化疗诱导的细胞毒性

王荣利等。 生殖生物内分泌. .

摘要

背景：卵巢早衰（POF）是接受化疗的年轻女性面临的一个严重问题，其病理生理学基础是颗粒细胞功能障碍。根据以前的报道，月经源性干细胞（MenSCs）可以恢复化疗诱导POF小鼠的卵巢功能和卵泡生成。据报道，脂肪质量和肥胖相关（FTO）与卵母细胞的发育和成熟有关。在POF中FTO降低，并且可能是POF发生的生物标志物。敲除颗粒细胞中的FTO可促进细胞凋亡并抑制增殖。但FTO与卵巢修复的关系尚不清楚。本研究旨在探讨FTO的表达水平以及FTO在MenSC恢复受损颗粒细胞功能中的作用。

方法：首先，用顺铂建立颗粒细胞损伤模型。然后，本研究建立了MenSCs与受损颗粒细胞共培养模型和POF小鼠模型，以探讨FTO的作用。此外，还进行了获得和丧失功能研究、小干扰RNA转染和甲氯芬酸（MA）（一种高度选择性的FTO抑制剂）研究，以阐明FTO在颗粒细胞中的调节机制。

结果：MenSCs共培养可以通过增加FTO的表达来改善受损颗粒细胞的功能。MenSCs移植可恢复POF小鼠卵巢中FTO的表达。FTO的过度表达通过调节BNIP3的表达恢复了受损细胞的增殖并减少了凋亡。FTO的下调得到了相反的结果。

结论：FTO在治疗MenSCs时具有保护作用，可以通过降低BNIP3的表达来提高顺铂治疗后颗粒细胞的生存能力。同时，FTO可能为化疗诱导POF的治疗靶点提供新的见解。

关键词：BNIP3；自由贸易区；月经源性干细胞；POF。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
顺铂对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。A类采用CCK-8法测定顺铂对颗粒细胞活力的影响。顺铂以剂量依赖和时间依赖的方式抑制颗粒细胞增殖率。B类-F类qRT-PCR和western blotting显示，当顺铂浓度低于10µM时，随着顺铂浓度的增加，细胞的凋亡能力逐渐增强，而抗凋亡能力逐渐减弱。当顺铂浓度高于10µM时，得到相反的结果。给出了三个独立实验中的一个代表性实验。数据显示为三个独立实验的平均值±SD。β-肌动蛋白作为负载对照。(*第页 < 0.05; **第页 < 0.01; ***第页 < 0.001通过Student t检验。CCK-8：细胞计数试剂盒‐8）
图2
图2
MenSCs和条件培养基（CM）对体外损伤颗粒细胞凋亡和增殖的影响。A类-B类qRT-PCR和C类-E类western blotting表明，MenSCs与受损颗粒细胞共培养可以通过在转录和蛋白质水平上增加Bcl-2的表达和降低BAX的表达来提高的，从而提高其多个的，一。给出了三个独立实验中的一个代表性实验。F类采用CCK-8法测定从MenSC获得的条件培养基（CM）对受损颗粒细胞增殖的影响。结果表明，CM能显著提高受损颗粒细胞的存活率。β-肌动蛋白作为负载对照。结果代表三个独立实验的平均值±SEM。学生的t测试。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001)
图3
图3
MenSCs可恢复受损颗粒细胞和POF小鼠中FTO的表达。A类-C类qRT-PCR和western blotting结果显示，FTO在受损颗粒细胞中的表达降低，而MenSCs共同培养可以恢复其表达。D类-G公司建立POF小鼠模型和MenSCs移植模型，观察各组小鼠体重、血清E2、FSH和AMH水平的变化。图表显示了平均值±SEM（每组15只小鼠）。H（H）H&E染色显示不同处理后卵巢的形态、卵泡数和组织病理学变化。我IHC结果显示，与对照组相比，POF组FTO表达降低，而MenSCs移植可以恢复其表达。（n=15只/组）。HE染色中的比例尺代表8×200μm，而IHC染色中代表15×200μm。学生的t测试。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001)
图4
图4
FTO的过度表达减弱了顺铂诱导的颗粒细胞凋亡并促进其增殖。A类用qRT-PCR检测FTO的转染效率。B类-C类使用qRT-PCR评估转染颗粒细胞中Bcl-2和BAX的mRNA表达，并将其标准化为GAPDH。D类-G公司以β-肌动蛋白为负荷对照，通过western blotting检测不同组FTO、BAX和Bcl-2的蛋白表达。（H-K）Western blotting结果显示，FTO在受损颗粒细胞中的过度表达可以恢复顺铂诱导的FTO、Bcl-2和BAX的变化。L（左）-M（M）EdU标记和cck-8分析表明，顺铂诱导的损伤细胞中细胞活力受到抑制。然而，转染FTO后，损伤细胞的存活率增加。N个-O（运行）流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果表明，在顺铂诱导的损伤细胞中，细胞凋亡率增加，而FTO的联合转染可以使其恢复。结果代表三个独立实验的平均值±SEM。分别采用Student t检验和单因素方差分析对两个实验组和多个实验组进行比较。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，ns，无显著性）
图5
图5
FTO下调促进受损颗粒细胞凋亡。A类用qRT-PCR检测si-FTO的转染效率。B类-C类使用qRT-PCR评估转染颗粒细胞中Bcl-2和BAX的mRNA表达，并将其标准化为GAPDH。D类-G公司以β-肌动蛋白为负荷对照，通过western blotting检测不同组FTO、BAX和Bcl-2的蛋白表达。（H-K）Western blotting结果显示，抑制损伤颗粒细胞中FTO的表达可以增强顺铂诱导的FTO、Bcl-2和BAX的变化。L（左）-M（M）EdU标记和cck-8分析表明，顺铂诱导的损伤细胞中细胞活力受到抑制，而si-FTO在损伤细胞中的联合转染可以促进其作用。N个-O（运行）流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果表明，顺铂诱导的损伤细胞凋亡率增加，si-FTO联合转染可促进其凋亡。结果代表三个独立实验的平均值±SEM。分别采用Student t检验和单因素方差分析对两个实验组和多个实验组进行比较。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001)
图6
图6
FTO的过度表达通过下调BNIP3的表达来减弱受损颗粒细胞的凋亡。A类与NC组相比，FTO组BNIP3 mRNA水平降低。B类western blotting结果显示，FTO的过度表达可以逆转顺铂诱导的BNIP3表达水平。C类qRT-PCR显示FTO的下调增加了BNIP3的表达水平。D类western blotting显示FTO的下调促进了顺铂诱导的BNIP3的表达水平。β-肌动蛋白作为负载对照。给出了三个独立实验中的一个代表性实验。结果代表三个独立实验的平均值±SEM。分别采用Student t检验和单因素方差分析对两个实验组和多个实验组进行比较。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，ns，无显著性）
图7
图7
MA促进了顺铂诱导的颗粒细胞的细胞毒性，以及顺铂诱导的卵巢损伤。A类颗粒细胞与不同浓度的MA孵育48h，用cck-8法测定细胞活力。B类颗粒细胞在MA存在或不存在的情况下与选定的顺铂孵育48小时，并通过cck-8测定细胞活力。C类-G公司western blotting显示MA增加了顺铂诱导的BAX和BNIP3表达，降低了顺铂导致的FTO和Bcl-2表达。给出了三个独立实验中的一个代表性实验。结果代表三个独立实验的平均值±SEM。采用单因素方差分析对多组进行比较。H（H）HE染色显示MA促进了顺铂诱导的卵巢损伤。（n=15只/组）。(*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，ns，无显著性）
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