跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2022年2月22日；19(8):1172-1192.
doi:10.20892/j.issn.2095-3941.2021.0130。

HDAC抑制剂GCJ-490A通过IKKα抑制c-Met表达并克服非小细胞肺癌对吉非替尼的耐药性

丁河 1 2, 高英雷 1, 燕芬坊 1, 张阳明 3, 张树伟（Shuwei Zhang） 2 3, 包括南发俊 3, 建鼎 1 2, 易晨 1 2
附属公司

HDAC抑制剂GCJ-490A通过IKKα抑制c-Met表达并克服非小细胞肺癌对吉非替尼的耐药性

丁河等。 癌症生物医学. .

摘要

目标：新化合物GCJ-490A被发现是一种泛甾酮脱乙酰酶（HDAC）抑制剂，对HDAC1、HDAC3和HDAC6具有强大的抑制活性。由于HDAC在肺癌发展中的重要作用以及GCJ-490A在肺组织中的高度分布，我们探讨了GCJ-490 A对非小细胞肺癌（NSCLC）的抗肿瘤效力在体外和体内在本研究中。

方法：这个在体外通过增殖、凋亡和集落形成试验检测GCJ-490A单独或联合EGFR抑制剂吉非替尼对非小细胞肺癌的作用。使用NSCLC异种移植物模型研究GCJ-490A联合吉非替尼治疗NSCLC的疗效体内Western blot分析、荧光素酶报告子分析、染色质免疫沉淀分析、定量实时PCR、免疫组织化学和转录因子活性分析用于阐明可能的机制。

结果：GCJ-490A有效抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡在体外和体内有趣的是，GCJ-490A对HDAC1和HDAC6的抑制增加了IKKα启动子处的组蛋白乙酰化，并增强了IKKα转录，从而降低了c-Met。此外，这种c-Met下调被发现对GCJ-490A和吉非替尼的协同抗肿瘤活性至关重要。

结论：这些发现突出了HDAC抑制剂在非小细胞肺癌治疗中的潜力，并为HDAC抑制剂与EGFR抑制剂联合应用于临床试验提供了合理的依据。

关键词：HDAC抑制剂；IKKα；非小细胞肺癌；c-Met；吉非替尼。

PubMed免责声明

利益冲突声明

未披露潜在的利益冲突。

数字

图1
图1
GCJ-490A抑制NSCLC细胞增殖在体外和体内。（A） 集成电路50非小细胞肺癌细胞株暴露于GCJ-490A 72小时的值（B）通过FACS分析评估凋亡。用GCJ-490A处理非小细胞肺癌细胞48小时+/PI公司-和annexin V+/PI公司+标记细胞计数为凋亡细胞总数。（C） 用GCJ-490A处理A549、H460、H1975和HCC827/GR6细胞48小时后，检测凋亡相关蛋白的水平。（D）GCJ-490 A的抗肿瘤活性体内肿瘤生长曲线图显示了每个治疗组随时间的相对肿瘤体积（RTV）。（E） 各治疗组动物的体重随时间变化。全部在体外数据表示为来自至少3个独立实验的平均值±SD，并由双尾Student’s分析t吨-测试*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01; 490A:GCJ-490A，GEFI:吉非替尼。
图2
图2
GCJ-490A抑制c-Met表达，从而克服吉非替尼耐药性在体外和体内。（A） GCJ-490A处理的A549和HCC827/GR6细胞基因表达的RNA-seq分析。（B） 通过定量实时PCR和Western blot验证RNA-seq分析结果。（C） 集成电路50非小细胞肺癌细胞株暴露于吉非替尼72小时后的值（D）平均CI值。用GCJ-490A和吉非替尼单独或联合处理非小细胞肺癌细胞72小时（E）集落形成分析。用GCJ-490A和吉非替尼单独或联合治疗NSCLC细胞2周。经GCJ-490A、吉非替尼或两者处理72小时后，sic-Met（F）和2#sic-Met-转染细胞对非小细胞肺癌细胞中c-Met的耗竭（G）。（H） 在2种异种移植模型中单独或联合应用吉非替尼和GCJ-490A治疗的裸鼠的相对肿瘤体积（RTV）和平均体重。（一） 实验结束时A549和HCC827/GR6肿瘤组织中c-MET的水平体内通过IHC分析检测研究（比例尺100μm）。全部在体外实验重复了3次，得到了相近的结果。数据表示为平均值±SD*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01; ***P（P）< 0.001,#P（P）< 0.05;##P（P）< 0.01;###P（P）< 0.001;&P（P）< 0.05;&&P（P）< 0.01;&&&P（P）<0.001，490A:GCJ-490A，GEFI:吉非替尼，NC：阴性对照#1、#2、#3是3种不同的RNAi寡核苷酸。
图3
图3
GCJ-490A以依赖于IKKα/NF-κB通路的方式降低c-Met的表达。（A） GO富集分析和基因集富集分析（GSEA）。通过对RNA-seq分析中显著改变的基因进行分析，发现NF-κB通路得到了丰富。IκB激酶/NF-κB信号的GSEA图显示，在标准化富集分数中，与GCJ-490A治疗呈负相关。GCJ-490A处理的NSCLC细胞中IKKα、RelA/p65和磷酸化-RelA/p65（B）的蛋白水平、IKK a（C）的mRNA水平以及RelA/p65（D）的分布。通过免疫印迹分析检测IKKα敲除（E）和过度表达细胞（F）中c-Met、RelA/p65和磷酸化-RelA/p65的蛋白水平。相对mRNA水平c-Met公司IKKα敲除（H）和过度表达细胞（G）。（一） Western blot分析表明，IKKα的敲除逆转了GCJ-490A介导的A549和HCC827/GR6细胞c-Met表达的下降。所有数据均代表至少3个独立实验，并以平均值表示±标准偏差*P（P）< 0.05; **P（P）<0.01，490A:GCJ-490A，p65:RelA/p65，p-p65:phospho-RelA/p 65，NC：阴性对照，mock：质粒载体对照#1、#2、#3是3种不同的RNAi寡核苷酸。
图4
图4
c-Met作为NF-κB的直接靶基因被GCJ-490A抑制。（A） 通过ChIP在有或无GCJ-490A处理的细胞中测定RelA/p65与c-Met启动子的结合。qPCR数据在横轴上以百分比输入的形式显示c-Met公司启动子cDNA片段显示在纵轴上。（B） （C）GCJ-490A对NSCLC细胞和IKKα缺失的NSCLC中NF-κB RelA/p65转录因子结合活性的影响。（D） 测定相对荧光素酶活性。c-Met公司发起人和RelA/p65质粒转染HEK293T细胞（1×106单元格）。测量相对荧光素酶活性，并将其表示为萤火虫荧光素酶与雷尼利亚萤光素酶。转染sip65（E）、lent-p65（F）或shp65（G）的非小细胞肺癌细胞中c-Met的蛋白水平，以及转染lent-p65F或shp65mRNA水平。所有数据均代表至少3个独立实验，如下所示平均值±标准偏差。*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001. 490A:GCJ-490A，p65:RelA/p65，NC：阴性对照#1、#2、#3是3种不同的RNAi寡核苷酸。
图5
图5
GCJ-490A增加组蛋白乙酰化IKK公司α启动子和促进IKK公司α转录。（A） H3K9乙酰化IKK公司用ChIP在GCJ-490A处理的细胞中观察到α启动子区。（B–D）蛋白印迹检测HDAC1、HDAC6或HDAC3敲除细胞中内源性IKKα。（E） 示意图描述了GCJ-490A克服非小细胞肺癌细胞中吉非替尼耐药性的拟议机制。所有数据均代表至少3个独立实验，并以平均值±SD表示*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）<0.001，p65：RelA/p65，NC：阴性对照#1、#2、#3是3种不同的RNAi寡核苷酸。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Damaskos C、Tomos I、Garmpis N、Karakatsani A、Dimitroulis D、Garmpi A等。组蛋白脱乙酰酶抑制剂作为一种新型靶向治疗非小细胞肺癌的药物：我们现在在哪里？我们应该期待什么？2018年抗癌研究；38:37–43.-公共医学
    1. Ciardiello F，Tortora G.药物治疗：癌症治疗中的EGFR拮抗剂。《N Engl J Med.2008》；358:1160–74.-公共医学
    1. Flavahan WA，Gaskell E，Bernstein BE。表观遗传可塑性与癌症特征。科学。2017;357:266–74.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ceccacci E，Minucci S.癌症治疗中组蛋白脱乙酰酶的抑制：白血病的教训。英国癌症杂志。2016;114:605–11.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Petta V、Gkiozos I、Strimpakos A、Syrigos K组蛋白和肺癌：组蛋白脱乙酰酶是一个有希望的治疗靶点吗？癌症化疗师。药理学。2013;72:935–52.-公共医学

出版物类型