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。2021年8月11日；7（8）：e07759。
doi:10.1016/j.heliyon.2021.e07759。 eCollection 2021年8月。

Orengedokuto对BV-2小胶质细胞诱导PGE2生成的抑制作用

岩田吉香 1, 马里科·米奥 1, Akiko Hirotsu先生 1, 大本健一郎 1, 松山俊一（Tomonori Matsuyama） 2, Nobuo Uetsuki先生 1, 田中智宏 1
附属公司

Orengedokuto对BV-2小胶质细胞诱导PGE2产生的抑制作用

岩田佳佳等。 太阳神。 。

摘要

背景和目的：反应性小胶质细胞与由细胞因子、一氧化氮和前列腺素等促炎分子的产生引起的神经炎症有关。这些分子的过度表达可能会引发神经损伤，从而导致神经退行性疾病。传统草药Orengedokuto（OGT）被广泛用于治疗炎症相关疾病。然而，它如何影响神经炎症尚不清楚。

实验程序：本研究采用实时RT-PCR和ELISA方法研究了OGT对BV-2小胶质细胞炎症分子诱导的影响。安体内然后在小鼠身上验证这些作用。

结果和结论：OGT对脂多糖（LPS）刺激的BV-2细胞产生前列腺素E2（PGE2）具有剂量依赖性抑制作用。为了阐明PGE2抑制的机制，我们检测了环氧合酶（COX），发现OGT在转录或翻译水平上都没有抑制COX-1表达或抑制LPS诱导的COX-2上调。此外，OGT在抑制PGE2生成的浓度范围内未抑制COX酶活性，表明OGT的作用与COX无关。在原代培养的星形胶质细胞和小鼠脑中实验复制OGT对BV-2细胞PGE2生成的抑制作用。OGT可以通过调节PGE2的表达来治疗神经炎性疾病。

关键词：小胶质细胞；神经炎症；Orengedokuto；第2页；第38页地图。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
Tosumura&Co.提供的Orengedokuto三维高效液相色谱图谱。
图2
图2
Orengedokuto（OGT）及其成分对BV-2细胞PGE2生成的影响。将BV-2小胶质细胞暴露于OGT（A）或其成分、黄芩（S.radid）（B）、黄连（C.rhizota）（C）、栀子（G.fructus）（D）、黄柏皮层（P.cortex）（E）和小檗碱（F）中24 h，并加入脂多糖（LPS）（1μG/ml）。用酶免疫法分析培养液中PGE2的水平。数据显示为三到五个独立实验的平均值±S.D.。**P（P）<0.01与对照，*P（P）与对照组相比<0.05，不适用。，不显著。
图3
图3
OGT对BV-2细胞的细胞毒性作用。用OGT（1、5和10μg/ml）处理BV-2细胞24小时。用MTT（A）和LDH（B）测定细胞活力和损伤。结果显示为对照的相对比率。数据显示为三个独立实验的平均值±S.D；不适用。，不显著。
图4
图4
OGT对BV-2细胞COX表达的影响。用LPS（1μg/ml）将BV-2细胞暴露于OGT 24 h。使用实时qRT-PCR分析COX-1（A）和COX-2（B）mRNA，将其归一化为18S rRNA，并相对于对照平均值进行表达。数据以三到五个独立实验的平均值±S.D.表示。**P（P）与对照组相比<0.01，不适用。，不显著。OGT暴露于BV-2细胞24小时后，通过免疫印迹分析（C）分析全细胞裂解液中COX-1和COX-2的表达。这些数字代表了至少三个独立实验。显示了COX-1/β-actin（D）和COX-2/β-attin（E）的免疫印迹定量。*P（P）与对照组相比<0.05，不适用。，不显著。用COX-1和COX-2（F）环氧化酶活性测定试剂盒测定OGT对COX酶活性的影响。数据显示为三个独立实验的平均值±标准差。
图5
图5
OGT对BV-2细胞中PGES表达的影响。用LPS（1μg/ml）将BV-2细胞暴露于OGT 24 h。使用实时qRT-PCR分析mPGES1（A）、mPGES2（B）和cPGES（C）mRNA，将其归一化为18S rRNA，并相对于对照小鼠的平均值进行表达。数据以三到四个独立实验的平均值±S.D.表示。**P（P）<0.01与对照，*P（P）与对照组相比<0.05，不适用。，不显著。OGT暴露于BV-2细胞24小时后，通过免疫印迹分析（D）分析全细胞裂解物的cPGES和β-actin表达。这些数字代表了至少三个独立实验。cPGES/β-actin的免疫印迹定量如E所示。不适用。，不显著。
图6
图6
OGT对BV-2细胞中cPLA-2的影响。OGT暴露于BV-2细胞4或24小时后，通过免疫印迹分析（A）分析全细胞裂解物的磷酸化或总cPLA2表达。荧光蛋白cPLA2/β-actin的免疫印迹定量显示在B（4 h）和C（24 h）中。不适用。，不显著。
图7
图7
OGT对BV-2细胞MAPK的影响。将BV-2暴露于含有或不含OGT的LPS（1μg/ml）中24 h。通过免疫印迹法（A）分析全细胞裂解液中的磷胞外信号调节激酶（p-ERK）、ERK、磷酸JNK（p-JNK）、JNK、磷酸p38（p-p38）和p38 MAPK表达。这些数字代表了至少三个独立实验。B中显示了p-p38/p38 MAPK的免疫印迹定量。BV-2小胶质细胞用SB203580（20μM）或OGT（10μg/ml）（C–E）暴露于LPS（1μg/ml）中24 h。酶免疫分析法检测PGE2水平。使用实时qRT-PCR分析COX-1（D）和COX-2（E）mRNA，将其标准化为18S rRNA，并相对于对照的平均值表达。数据显示为三个独立实验的平均值±S.D.。**P（P）<0.01与对照，*P（P）与对照组相比<0.05，不适用。，不显著。
图8
图8
OGT对BV-2细胞中促炎细胞因子表达和NF-κB活性的影响。将BV-2细胞暴露于指定浓度的LPS（1μg/ml）和OGT 24小时。实时RT-PCR检测白细胞介素（IL）-1β（A）、IL-6（B）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）（C）mRNA。数据以三到五个独立实验的平均值±S.D.表示。IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平标准化为18S的表达水平，并相对于对照平均值表达。（D） BV-2细胞暴露于LPS和OGT 24 h，用Elisa试剂盒测定核因子κB（NF-κB）转录活性。数据显示为三个独立实验的平均值±S.D.。**P（P）<0.01与对照，*P（P）与对照组相比<0.05，不适用。，不显著。
图9
图9
OGT对原代培养星形胶质细胞和小鼠大脑中PGE2的抑制作用。将原代培养的星形胶质细胞暴露于LPS（1μg/ml）和OGT。用酶免疫分析法（A）检测PGE2水平。数据显示为三个独立实验的平均值±S.D.。**P（P）与对照组相比<0.01，不适用。，不显著。BALB/cCrSlc小鼠口服OGT 4 g/kg，持续4天；注射LPS（10 mg/kg）后24 h，收获小鼠脑组织，并量化PGE2浓度（B）。数据表示为平均值±S.E.（n=6）。
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