跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年4月；21(4):366.
doi:10.3892/etm.2021.9797。 Epub 2021年2月18日。

MicroRNA-185通过靶向过氧化物酶体增殖物激活受体β抑制HaCaT角质形成细胞的增殖和迁移

杨靖哲 1, 平阳登 2, 齐永刚 三, 新树峰 1, 海陵文 1, 陈凤平 1
附属机构

MicroRNA-185通过靶向过氧化物酶体增殖物激活受体β抑制HaCaT角质形成细胞的增殖和迁移

杨靖哲等人。 实验治疗学. 2021年4月.

摘要

角质形成细胞的增殖和迁移是皮肤损伤后修复的主要过程。已有研究表明，microRNAs（miRNAs/miRs）与角质形成细胞的增殖和迁移有关。然而，miR-185影响角质形成细胞这些过程的机制尚不清楚。在本研究中，通过逆转录定量PCR检测HaCaT角质形成细胞中miR-185和过氧化物酶体增殖物激活受体β（PPARβ）的表达水平。使用细胞计数试剂盒-8和集落形成分析评估细胞增殖。Western blot分析检测细胞增殖、迁移和PI3K/AKT信号通路相关蛋白水平。此外，使用Transwell分析测定细胞的迁移能力。miR-185的靶基因通过双核糖核酸酶报告子分析进行了验证。结果表明，miR-185的过度表达抑制了HaCaT角质形成细胞中PI3K/AKT信号通路的增殖、迁移和激活。PPARβ被认为是miR-185的靶点，其过度表达促进了HaCaT角质形成细胞的增殖和迁移，而其敲除则表现出不利影响。此外，PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号通路的激活，并降低HaCaT角质形成细胞的增殖和迁移。此外，过度表达的PPARβ逆转了miR-185过度表达对PI3K/AKT信号通路的增殖、迁移和激活的抑制作用。总之，本研究结果表明，miR-185通过靶向PPARβ抑制PI3K/AKT信号通路的激活，从而调节HaCaT角质形成细胞的增殖和迁移。本研究为miR-185作为创伤修复靶点的应用提供了新的理论依据。

关键词：HaCaT角质形成细胞；PI3K/AKT信号通路；microRNA-185；迁移；过氧化物酶体增殖物激活受体β；增殖。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
miR-185表达对HaCaT角质形成细胞增殖的影响。用miR-185和抗miR-185或其NCs转染HaCaT角质形成细胞。（A） 进行逆转录定量PCR以检测miR-185的表达并评估转染效率。（B） 采用细胞计数试剂盒-8分析评估HaCaT角质形成细胞的增殖。（C） 采用集落形成实验检测HaCaT角质形成细胞的集落形成能力。（D） Western blot分析评估HaCaT角质形成细胞中cyclin D1、CDK6和CDK4的蛋白水平。*P<0.05。miR，microRNA；NC，阴性对照；外径，光密度。
图2
图2
miR-185表达对HaCaT角质形成细胞迁移的影响。用miR-185和抗-miR-185或其NC转染HaCaT角质形成细胞。（A） 使用Transwell分析法测定迁移的HaCaT角质形成细胞的数量。（B） western blot分析检测HaCaT角质形成细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白水平。*P<0.05。miR，microRNA；NC，阴性对照。
图3
图3
miR-185直接靶向HaCaT角质形成细胞中的PPARβ。（A） 给出了miR-185和PPARβ之间的WT和突变结合位点。miR-185和PPARβ3'-UTR的匹配序列用大写字母表示，而那些无法匹配的序列用小写字母表示。（B和C）进行双重核糖核酸酶报告分析，以验证miR-185与PPARβ3'-UTR的结合。（D） 采用逆转录定量PCR检测PPARβ的表达水平。（E） Western blot分析测定PPARβ、ILK、PDK1、p-AKT和AKT的蛋白水平。*P<0.05。过氧化物酶体增殖物激活受体β；ILK，整合素连接激酶；PDK1，磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶1；miR、微小RNA；NC，阴性对照；WT，野生型；Mut，突变体；p、 磷酸化。
图4
图4
PPARβ表达水平对HaCaT角质形成细胞增殖和迁移的影响。用si-PPARβ和PPARβ过表达质粒或其NCs转染HaCaT角质形成细胞。（A） Western blot分析检测PPARβ蛋白水平并评估转染效率。（B） 采用细胞计数试剂盒-8测定HaCaT角质形成细胞的增殖。（C） 用集落形成试验评估HaCaT角质形成细胞中的集落数。（D） 采用Transwell分析评估HaCaT角质形成细胞的迁移。（E） western blot分析检测HaCaT角质形成细胞中cyclin D1、CDK6、CDK4、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。*P<0.05。过氧化物酶体增殖物激活受体β；NC，阴性对照；si，小干扰。
图5
图5
PI3K抑制剂LY294002对HaCaT角质形成细胞增殖和迁移的影响。用50µmol/l PI3K抑制剂LY294002处理HaCaT角质形成细胞48 h。（A）通过western blot分析测定S473和T308处p-AKT的磷酸化水平和p-AKT/AKT比率。（B） 使用细胞计数试剂盒-8分析评估HaCaT角质形成细胞的增殖。（C） 集落形成试验用于评估HaCaT角质形成细胞中的集落数量。（D） 使用Transwell分析检测迁移的HaCaT角质形成细胞的数量。（E） western blot分析检测HaCaT角质形成细胞中cyclin D1、CDK6、CDK4、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。*与对照组相比，P<0.05。p、 磷酸化。
图6
图6
miR-185和PPARβ过度表达对HaCaT角质形成细胞增殖和迁移的影响。用miR-185和PPARβ过表达质粒或其NC转染HaCaT角质形成细胞。（A） western blot分析测定HaCaT角质形成细胞中PPARβ、ILK、PDK1、p-AKT-S473、p-AKT T308和AKT的蛋白水平。（B） 使用细胞计数试剂盒-8分析评估HaCaT角质形成细胞的增殖。（C） 用集落形成试验测定HaCaT角质形成细胞中的集落数。（D） Transwell分析用于评估迁移的HaCaT角质形成细胞的数量。（E） western blot分析评估HaCaT角质形成细胞中cyclin D1、CDK6、CDK4、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。*P<0.05。PPARβ，过氧化物酶体增殖物激活受体β；ILK，整合素连接激酶；PDK1，磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶1；miR，microRNA；NC，阴性对照；p、 磷酸化。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Krafts KP。组织修复：隐藏的戏剧。器官发生。2010;6:225–233. doi:10.4161/org.6.4.12555。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Reinke JM，Sorg H.伤口修复和再生。欧洲外科研究2012；49:35–43. doi:10.1159/000339613。-内政部-公共医学
    1. Gurtner GC、Werner S、Barrandon Y、Longaker MT。伤口修复和再生。自然。2008;453:314–321. doi:10.1038/nature07039。-内政部-公共医学
    1. Kiwanuka E、Hackl F、Caterson EJ、Nowinski D、Junker JP、Gerdin B、Eriksson E。CCN2在再上皮化过程中由角质形成细胞瞬时表达，并通过ras-MEK-ERK信号通路在体外调节角质细胞迁移。外科研究杂志2013；185:e109–e119。doi:10.1016/j.jss.2013.05.065。-内政部-公共医学
    1. Shilo S、Roy S、Khanna S、Sen CK。皮肤伤口愈合中的微RNA：一种新范式。DNA细胞生物学。2007;26:227–237. doi:10.1089/dna.2006.0568。-内政部-公共医学

赠款和资金

基金：没有收到任何资金。