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.2019年11月23日；11(12):1851.
doi:10.3390/cancers11121851。

MTA2作为潜在的生物标志物及其在人肾癌转移过程中的作用

陈永元 1, 董伟雄 2 三, Shih-Chi Su公司 4 5, 林嘉良 1, 杨顺发 6, 李楚彻（Chu-Che Lee） 7, Chang-Fang Yeh公司 1, 谢义贤 1 8 9, 蔡任弼 10 11
附属公司

MTA2作为潜在的生物标志物及其在人肾癌转移过程中的作用

陈永元等。 癌症（巴塞尔）. .

摘要

转移相关蛋白2（MTA2）以前被认为是维持几种人类癌症恶性潜能的必要条件。然而，MTA2在肾细胞癌（RCC）进展中的作用尚未明确。在这项研究中，MTA2在RCC组织和细胞系中的表达显著增加。MTA2表达增加与肿瘤分级显著相关(第页=0.002），是RCC肿瘤分级高的总体生存率的独立预后因素。MTA2敲低抑制了RCC细胞的迁移、侵袭和体内转移，而对细胞增殖没有影响。关于分子机制，MTA2敲除降低了RCC细胞中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的活性、蛋白水平和mRNA表达。进一步分析表明，miR-133b表达较低的患者的生存率低于癌症基因组图谱数据库中表达较高的患者。此外，miR-133b调节MMP-9启动子活性的3'非翻译区（UTR），随后调节肾细胞癌细胞中MTA2异常表达的迁移和侵袭能力。MTA2的抑制可能通过调节靶向MMP-9的miR-133b的表达而促进人肾癌的转移。

关键词：基质金属蛋白酶-9；MTA2；转移；miR-133b；肾细胞癌。

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数字

图1
图1
转移相关蛋白2（MTA2）在人肾细胞癌（RCC）和RCC细胞中的表达及作用。(A类)采用免疫组织化学染色法检测1、2、3级肾细胞癌和正常肾组织中MTA2的表达强度（×40）。(B类)肿瘤基因组图谱（TCGA）数据集中RCC和正常组织的MTA2 mRNA表达。(C类)肾细胞癌1级、2级和3级患者的MTA2 mRNA表达。(D类)患者总生存率的Kaplan-Meier曲线，按MTA2表达高低进行分类。(E类)分离HK2、A498、786-O、Caki-1和ACHN细胞的总裂解物，并用western blotting检测MTA2的个体表达；β-actin作为内部对照。(F类)采用逆转录聚合酶链反应检测MTA2 mRNA的表达。β-actin作为mRNA等负荷的内部对照。数值表示为三个独立实验的平均值±SE**第页与正常肾组织相比<0.01。
图2
图2
转移相关蛋白2（MTA2）的敲除不影响肾细胞癌（RCC）细胞的存活或增殖。(A类)western blotting证实了786-O、ACHN和Caki-1细胞的shLuc或shMTA2中MTA2的敲低表达。(B类)24和48小时后，采用MTT法评估shLuc或shMTA2-786-O、ACHN和Caki-1细胞的细胞活力(C类)shLuc–或shMTA2–786-O、ACHN和Caki-1细胞的流式细胞术分析。β-肌动蛋白被用作蛋白质等负荷的内部控制。数值表示为三个独立实验的平均值±SE**第页与shLuc细胞相比<0.01。
图3
图3
转移相关蛋白2（MTA2）敲低抑制肾细胞癌细胞的迁移和侵袭，并抑制体内肿瘤转移。(A类)利用western blotting验证了MTA2在786-O、ACHN和Caki-1细胞中的下调表达。(B类)采用迁移和Matrigel侵袭实验测定shLuc和shMTA2-786-O、-ACHN和–Caki-1细胞的迁移和侵袭能力。在光学显微镜下对Borden室下表面的细胞进行染色和拍照。迁移细胞的量化以直方图的形式呈现。(C类)shLuc和shMTA2组786-O和Caki-1细胞苏木精和伊红染色及Ki-67表达的代表性图像。(D类)shMTA2组的肺转移集落明显少于shLuc组的786-O和Caki-1细胞。数值表示为三个独立实验的平均值±标准误差（SE）**第页与shLuc细胞相比<0.01。
图4
图4
转移相关蛋白2（MTA2）敲除抑制肾癌细胞中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的活性、表达和mRNA水平。(A类,B类)分离shLuc–或shMTA2–786-O、Caki-1和ACHN细胞的总裂解物和mRNA，并使用western blotting和定量逆转录聚合酶链反应检测MTA2和MMP-9的个体表达。β-肌动蛋白和GAPDH被用作内部控制。(C类)收集条件培养基，使用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9活性，并通过密度测定法进行定量。(D类)用抗-MTA2和抗MMP-9抗体通过免疫荧光染色对shLuc-和shMTA2-786-O、-Caki-1和-ACHN细胞进行染色，并用4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）试剂对细胞核（蓝色）进行复染。(E类)癌症基因组图谱（TCGA）数据集用于创建Kaplan–Meier曲线，根据MMP-9的低或高表达描绘患者的总体生存率。(F类)使用TCGA数据集说明了MTA2和MMP-9之间相关性的线性趋势。数值表示为三个独立实验的平均值±SE**第页与shLuc细胞相比<0.01。
图5
图5
MMP-9是miR-133b的靶点，与肾癌（RCC）预后不良相关。(A类)从三个预测数据集（TargetScan、miRcode和miRBase）描述靶向MMP-9 mRNA的miR-133b的拟议模型示意图。(B类)MMP-9启动子3′-UTR处miR-133b预测结合位点示意图。(C类)采用定量聚合酶链反应（qPCR）检测四种RCC细胞和正常肾HK2细胞中miR-133b的表达。(D类)qPCR检测shLuc和shMTA2-RCC细胞中miR-133b的表达。(E类)来自癌症基因组图谱RCC数据集的肿瘤和正常组织中miR-133b的表达。(F类)根据miR-133b低表达和高表达分类的RCC患者总生存率的Kaplan-Meier曲线**第页与shLuc细胞相比<0.01。
图6
图6
miR-133b对shMTA2肾癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(A类)使用miR-133b antagomir或阴性对照（NC）转染shMTA2–RCC细胞后，使用RT-qPCR检测miR-133 b的表达。(B类)荧光素酶活性测定。(C类)western blotting检测MTA2和MMP-9的蛋白表达。β-Actin被用作内部控制。(D类)利用迁移和Matrigel侵袭实验测定RCC细胞的迁移和侵袭能力。对博登室下表面的细胞进行染色，并在放大400倍的光学显微镜下拍照。数值表示为三个独立实验的平均值±SE**第页与shLuc细胞相比<0.01#第页与shMTA2相比<0.01。NC、miR-133b阴性对照。
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