High-resolution quantitative proteome analysis reveals substantial differences between phagosomes of RAW 264.7 and bone marrow derived macrophages

doi:10.1002/pmic.201400431

.2015年9月；15(18):3169-74.

doi:10.1002/pmic.201400431。 Epub 2015年2月5日。

高分辨率定量蛋白质组分析显示RAW 264.7吞噬体与骨髓源巨噬细胞之间存在显著差异

郭曼曼¹, 阿内塔·哈特洛娃¹, 布莱恩·迪尔¹, 阿兰·普雷斯科特², 马雷克·吉尔林斯基^三, 马提亚斯·特罗斯特¹

附属公司

¹英国苏格兰邓迪大学生命科学学院MRC蛋白质磷酸化和泛素化研究室。
²英国苏格兰邓迪大学生命科学学院细胞信号与免疫学系。
^三英国苏格兰邓迪大学生命科学学院计算生物学系。

PMID： 25504905
预防性维修识别码：项目经理4833182
内政部： 10.1002/pmic.201400431

高分辨率定量蛋白质组分析显示RAW 264.7吞噬体与骨髓源巨噬细胞之间存在显著差异

郭曼曼等。蛋白质组学. 2015年9月.

.2015年9月；15(18):3169-74.

doi:10.1002/pmic.201400431。 Epub 2015年2月5日。

作者

郭曼曼¹, 阿内塔·哈特洛娃¹, 布莱恩·迪尔¹, 阿兰·普雷斯科特², 马雷克·吉尔林斯基^三, 马提亚斯·特罗斯特¹

附属公司

¹英国苏格兰邓迪大学生命科学学院MRC蛋白质磷酸化和泛素化研究室。
²英国苏格兰邓迪大学生命科学学院细胞信号与免疫学系。
^三英国苏格兰邓迪大学生命科学学院计算生物学系。

PMID： 25504905
预防性维修识别码：项目经理4833182
内政部： 10.1002/pmic.201400431

摘要

巨噬细胞是重要的免疫细胞，通过吞噬作用吸收外来颗粒和微生物，在先天免疫的最前沿发挥作用。RAW 264.7细胞系通常用于巨噬细胞和吞噬作用领域的实验。然而，目前尚不清楚其功能与原代巨噬细胞相比如何。在这里，我们对来自RAW 264.7的吞噬体和骨髓来源的巨噬细胞的2500多个吞噬体蛋白质进行了深入的蛋白质组学表征。我们的数据表明，包括甘露糖受体1和Siglec-1等重要受体在内的大量蛋白质存在显著差异。此外，骨髓来源的巨噬细胞吞噬体通过与内体和溶酶体融合而成熟得更快，我们通过荧光吞噬试验验证了这一点。我们为该领域的研究人员提供了宝贵的资源，并建议在研究吞噬功能时仔细使用RAW 264.7细胞系。所有MS数据都保存在ProteomeXchange中，标识符为PXD001293(http://proteomecentral.proteomexchange.org/dataset/PXD001293).

关键词：细胞生物学；巨噬细胞；噬菌体；蛋白质组学RAW 264.7。

PubMed免责声明

数字

图1
与RAW 264.7巨噬细胞相比，BMDM的吞噬作用、吞噬体酸化和蛋白水解速率增加。（A）与RAW 264.7细胞相比，BMDM显示AF‐488涂层3μm颗粒的吞噬效率显著提高。用肌动蛋白聚合抑制剂细胞松弛素D处理的细胞作为非吞噬细胞阴性对照。误差条表示成对标准偏差t吨测试对比***第页<0.0001和**第页< 0.001. （B–D）荧光吞噬体分析的实时动力学。与RAW 264.7细胞相比，BMDM吞噬体酸化速度显著加快（B），吞噬体蛋白水解速度更快、强度更强（C），但氧化爆发类似（D）。线条周围的阴影区域是六个重复的平均值（SEM）的标准误差。

图2
GO术语富集和吞噬体网络分析。（A）从BMDM或RAW 264.7细胞分离的吞噬体蛋白质组中富集的蛋白质的选定GO术语。（B）吞噬体网络分析显示，与RAW 264.7细胞相比，BMDM（绿色）吞噬体蛋白质组中的细胞过程显著增加，或减少（红色）。节点之间的连接（灰色边缘）代表了实验证明的蛋白质之间的物理相互作用。

图3
蛋白质组学结果的验证。（A）蛋白质组学数据中六种蛋白质的蛋白质印迹分析。P、吞噬体；TM，总膜提取物；TCL，总细胞裂解物。为了方便起见，给出了蛋白质组学结果的对数比。（B） Rab7a、Siglec‐1和Syk蛋白的荧光显微镜显示，Siglec‐1在BMDM中的表达比RAW 264.7细胞强得多。Rab7a定位于两种细胞类型的吞噬体，但Siglec‐1和Syk仅与BMDM中的吞噬体相关。（C）由于甘露糖受体1（MRC1）的高表达，与RAW 264.7细胞相比，BMDM中甘露聚糖包衣珠的吞噬效率显著提高。误差条表示成对标准偏差t吨测试对比***第页<0.0001和**第页< 0.001.

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[3] Wynn，T.A.、Chawla，A.、Pollard，J.W.，《发育、体内平衡和疾病中的巨噬细胞生物学》。《自然》杂志2013，496，445–455。-项目管理咨询公司-公共医学

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