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.2013年10月30日;33(44):17429-34.
doi:10.1523/JNEUROSCI.1466-13.2013。

可诱导的突触前谷氨酰胺转运支持Held突触花萼的谷氨酸能传递

附属机构

可诱导的突触前谷氨酰胺转运支持Held突触花萼的谷氨酸能传递

丹妮拉·比卢普斯等人。 神经科学. .

摘要

兴奋性神经递质谷氨酸在突触中循环的机制目前尚不清楚。通过检测突触前末端质膜转运蛋白的功能表达,我们旨在阐明谷氨酸循环的一些机制。利用Held突触前终末大鼠花萼的全细胞电压灯记录,我们的数据首次表明,谷氨酸前体谷氨酰胺可直接激活一种生电的钠依赖性突触前转运体,它为突触前谷氨酸的生成提供谷氨酰胺,并帮助维持突触传递。有趣的是,突触前质膜上这种转运体的功能表达是由末端的电活动动态控制的,这表明神经递质前体的摄取是由单个末端的需求控制的。转运体电流的诱导是钙依赖性的,并被肉毒杆菌神经毒素C抑制,这表明当末端激活时,SNARE依赖性胞吐参与将转运体插入质膜。相反,突触前终末的失活会导致通过氯氰菊酯介导的内吞作用去除转运蛋白。为了研究突触前谷氨酰胺转运体是否为产生突触释放的谷氨酸提供前体,我们测量了微型EPSCs以评估囊泡谷氨酸含量。当突触前谷氨酸池被突触活动翻转时,用MeAIB抑制突触前谷氨酸转运体可显著降低小EPSC振幅。这表明突触前谷氨酰胺转运主要参与谷氨酸的产生,并有助于维持兴奋性神经传递。

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数字

图1。
图1。
膜去极化快速可逆地在突触前终末诱导钙和胞吐依赖性谷氨酰胺介导的电流。A类,脑干切片中围绕MNTB神经元(#)的Held突触前末端(箭头)的Lucifer黄色填充花萼的差分干涉对比图像和相应的荧光图像。谷氨酰胺(10 m)或谷氨酸(200μ)通过从距终端等距放置的两个吸管(*)中的一个吸管喷射压力来施加压力。B类,在钙激活前后,5 s喷注谷氨酸不会引起膜电流2+去极化序列通道(插图;校准:1 nA,10 ms)。谷氨酰胺诱导Ca后的膜电流2+-通道激活。C类,I的大小格林随着时间的推移,在控制中(黑色痕迹),在贴片吸管中使用Pitstop-1(灰色痕迹)。如箭头所示,在每次吹气之前刺激突触前钙通道。D类,平均数据显示I甘氨酸由突触前钙刺激引起2+突触前终末钙笼的电流或释放。通过停止刺激、清除外部钙,诱导被逆转2+或将BoNT/C加入到广口吸管中。Pitstop-1阻止了诱导逆转**第页< 0.01. ***第页< 0.001.
图2。
图2。
诱导的突触前谷氨酰胺反应由氨基酸转运体介导。A类,单细胞代表性微量谷氨酰胺5 s吞吐应用(10 m)诱导被氨基酸转运蛋白底物MeAIB基本上抑制的膜电流(20ms).B类,平均数据显示MeAIB或去除外部Na+消除I格林,而200μTBOA或1米 d日-天冬氨酸没有作用**第页< 0.01. ***第页< 0.001.C类,I的大小格林钙活化后2+当MeAIB应用于浴液中并包含在吸管中时,单个细胞中的电流显示出快速抑制。D类,I的电流-电压关系格林表示转运体而非离子通道激活(n个每种电压≥3)。
图3。
图3。
突触前谷氨酰胺转运维持谷氨酸能传播。A类,在200 Hz刺激以促进突触前谷氨酸池的周转后,在浴敷20 m之前和浴敷期间,从电压钳制的突触后MNTB主要神经元记录的mEPSC振幅MeAIB(应用条,黑色痕迹;n个=5)和对照组(200 Hz刺激,但无MeAIB;灰色痕迹;n个= 5).B类,MeAIB在200 Hz刺激期间显著抑制mEPSC振幅,但在0.1 Hz刺激期间不降低*第页< 0.05.C类,显示应用MeAIB之前和之后10-15分钟以200 Hz刺激单个细胞的mEPSC振幅累积频率的代表性图表。

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