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图6

图6。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

剪切应力对纯化血管性血友病因子Ristocetin辅因子活性的影响。
剪切应力降低了对照血浆冷冻上清液中von Willebrand因子的瑞斯托西丁辅因子活性,但增加了血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者血浆冷冻上清中的瑞斯托西汀辅因子活性。瑞斯托西丁辅因子活性表示为无剪切应力时活性的百分比。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.
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图3

图3。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

12例急性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者和11例血浆置换治疗后患者的IgG抑制活性与分离IgG的血浆样品的抑制活性有关。
从患者血浆样本中分离出IgG抗体,并与对照血浆混合,绘制蛋白酶活性与对照血浆和患者血浆样本混合中测得的蛋白酶活性的曲线。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.
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图4

图4。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

从血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者血浆中分离的IgG抗体对血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的抑制(a组)和抗人Fab区抗体对抑制活性的中和(B组)。
在A组中,对照血浆和从患者分离的IgG抗体的蛋白酶活性与混合物中的最终IgG浓度进行标绘(对数标度)。还显示了对照血浆和对照IgG混合物的蛋白酶活性。在B组中,对照血浆、从患者分离的IgG抗体和Fab区(抗Fab)或Fc区(抗Fc)的IgG-抗体的混合物的蛋白酶活性与混合物中抗Fab或抗Fc与IgG的比率(对数标度)相比较。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.
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图2

图2。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

血管性血友病因子裂解蛋白酶抑制剂的检测。
在A组中,对来自21名其他自身免疫或血液疾病患者、37名急性血栓性血小板减少性紫癜患者(39份样品)、,16例血栓性血小板减少性紫癜患者病情缓解。B组显示放射自显影的结果。Von Willebrand因子在与加热对照血浆孵育的对照血浆中被裂解(第3和第4道),而与血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者血浆样品孵育后的对照血浆(第1和第2道)中的裂解最小。EDTA在1号和3号车道的缓冲区中不存在,在2号和4号车道中存在。在C组中,在血栓性血小板减少性紫癜患者和对照血浆的不同稀释液的3:1混合物中测量蛋白酶活性。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.
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图5

图5。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

剪切应力对纯化von Willebrand因子多聚体蛋白水解的影响。
将纯化的von Willebrand因子溶于对照血浆的冷冻上清液或来自血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的血浆样品中。图A显示了存在和不存在剪切应力的冷冻上清液中琼脂糖凝胶电泳的von Willebrand因子多聚体的大小。面板B显示了在存在和不存在剪切应力的情况下,聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹上断裂的350-kd和200-kd片段的频率。剪切应力以每秒6404的速率降低了多聚体的尺寸,并且仅在对照冷冻上清液中增加了裂解碎片的数量。对照血浆冷冻上清液中的von Willebrand因子增加了归一化峰值距离(面板C)和350-kd碎片数量(面板D),这取决于剪切应力的速率。归一化峰值距离大于1表明,与在没有剪切应力的情况下测得的尺寸相比,多聚体的尺寸减小了。350-kd碎片的数量表示为无剪切应力时碎片数量的百分比。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.
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图1

图1。来源:VON WILLEBRAND因子抗体——急性血栓形成性血小板减少性紫癜中的裂解蛋白酶。

Von Willebrand因子–37例血小板减少性紫癜患者和74名对照者血浆样本中的蛋白酶裂解活性。
每个样品中的蛋白酶活性由纯化的von Willebrand因子产生的350-kd条带的强度反映,并以对照血浆中的活性百分比表示。A组显示了血浆置换治疗前在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)急性发作期间获得的39份血浆样品、治疗后获得的23份样品和缓解期间获得的16份样品的蛋白酶活性。钻石代表五个样品,并圈出一个样品。B组显示了从35名随机选择的无血栓性血小板减少性紫癜患者、21名其他自身免疫或血液疾病患者以及18名肝素诱导的血小板减少症患者的血浆样本中获得的蛋白酶活性。C组显示了在急性发作和缓解期间从七名血栓性血小板减少性紫癜患者的血浆样本中获得的蛋白酶活性。D组显示,对照血浆(第1和第2道)中纯化的血管性血友病因子产生的200-kd、350-kd和更大片段的复合免疫印迹,但在两名急性血小板减少性紫癜患者(第3、4、5和6道)的血浆样品中没有。每个样品检测两次。EDTA在1、3和5号车道的缓冲区中不存在,在2、4和6号车道中存在。

Han-Mou Tsai等人,《英国医学杂志》;339(22):1585-1594.

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