(一)使用软件工具Multalign对包含人类COL4A6蛋白的甘氨酸-591和其他物种的同源蛋白的80个氨基酸进行多序列比对(http://multalin.toulouse.inra.fr/multalin网站/). 甘氨酸-591是完全保守的（黑色垂直条；注意，由于其他物种COL4A6中的插入，氨基酸591在排列中移动了19个位置到610；红色字母：高一致性，蓝色：低一致性，黑色：中性）。(b条)野生型COL4A6（上部）与Gly591Ser变体（下部）的结构比较。左下图显示了沿COL4A6氨基酸序列的估计熔化温度（摄氏度）。相应的突变位点用箭头高亮显示。Gly591Ser突变严重影响自然模型的熔化温度。在三维模型（右侧子图）中，COL4A6链显示为蓝色，而白色丝带是异三方结构中相应的COL4A5链。原子和键被涂成红色，以防它们与其他螺旋的原子发生碰撞或发生不利接触（范德瓦尔斯重叠>0.6º）。碰撞原子的配对用黄线表示。在野生型COL4A6的591位，Gly完全没有侧链，并且生成了三条链的无碰撞构象。相比之下，Ser的突变在相同位置产生非典型的大侧链结构。在三螺旋胶原蛋白结构模型中，该侧链有几个硬碰撞，降低了链间构象的稳定性，并可能触发四级结构的破坏。