20137774【PMID】-PMC-NCBI

人类的错觉变体GRXCR1型与先天性非综合征性听力损失相关
（A和B）双纯合变异体p.G64S（c.190G>A）和p.F153V（c.457T>G）（A）以及单变异体p.P38L（c.113C>T）（B）显示了亲缘系谱、先证者序列色谱图（箭头）以及由先证者和对照者以及其他脊椎动物物种基因组序列编码的GRXCR1的部分比对。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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图3.来源：Grxcr1突变是Pirouette小鼠内耳功能障碍的基础。

Grxcr1型编码一种潜在的“氧化还原”蛋白
（A）小鼠GRXCR1的预测氨基酸序列用一个字母缩写表示，并与人类（NP_001073945）、鸡（ENSGALT0000037467）和斑马鱼（ENSDARP00000102510）的同源序列对齐。黑色或灰色阴影表示至少三个物种的残留物分别相同或生化相似的位置。与谷胱甘肽蛋白相似的区域用灰色条表示，C末端的保守半胱氨酸用星号标记。
（B）小鼠GRXCR1中央区域与猪谷氨酰氧还蛋白的对齐（蛋白质数据库编号d1kte）。在许多谷胱甘肽中发现的成对催化Cys残基用星号表示。预计与谷胱甘肽接触所需的残留物用箭头表示。二次结构信息：c，随机线圈；h、 α螺旋；e、测试版。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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三。

图5.来源：Grxcr1突变是Pirouette小鼠内耳功能障碍的基础。

GRXCR1蛋白在转染细胞中定位于肌动蛋白丝束
（A）转染COS-7成纤维细胞Grxcr1型-CFP、GRXCR1（绿色）与转染细胞皮层（箭头）和背部（箭头）表面丝状结构内的肌动蛋白丝（红色）共定位。GRXCR1与肌动蛋白应力纤维没有显著共定位（数据未显示）。GRXCR1阳性细胞的背侧投射的数量和肌动蛋白丝含量相对于相邻的未转染细胞增加。
（B） GRXCR1-GFP与转染的CL4上皮细胞顶部微绒毛中的肌动蛋白丝共定位，但微绒毛尺寸没有明显改变。
（C–E）在WT小鼠转染的耳蜗外植体中，GRXCR1-GFP定位于内毛细胞的整个静纤毛长度，包括未成熟的短行（箭头），其肌动蛋白丝含量低于长行。GRXCR1阳性静纤毛束中的静纤毛尺寸与邻近的未转染毛细胞相似（D，左）。
在转染的外植体培养物中，（F–H）GRXCR1-GFP也与非感觉上皮细胞顶端微绒毛中的肌动蛋白丝共定位。GRXCR1阳性微绒毛明显长于邻近的未转染细胞。
比例尺表示10μm（A）和5μm（B、E和H）。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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图4.来源：Grxcr1突变是Pirouette小鼠内耳功能障碍的基础。

GRXCR1定位于内耳感觉毛细胞顶面的立体纤毛
将WT C57BL/6J小鼠在三个不同时间点（P1、P5和成年）的内耳组织与GRXCR1（绿色）和罗丹明-球蛋白（红色）抗血清孵育。左侧的面板是合并的图像。
（A–F）耳蜗中GRXCR1在P1（A–C）和P5（D–F）的主要免疫反应部位是感觉毛细胞及其静纤毛束，在P1的OHC静纤毛和P5的IHC静纤毛中GRXCR1的水平明显较高。在P1小鼠中，GRXCR1免疫反应在束内的每一行静纤毛中显著，包括未成熟、较短的静纤毛，其丝状肌动蛋白的相对水平较低，通过罗丹明-球蛋白染色（A–C）显示。在P1（箭头，A-C）的感觉细胞顶端微绒毛和PI和P5（箭头，B和E）的激毛细胞中也观察到GRXCR1免疫反应。
（G–I）在成人中，GRXCR1定位于OHC（插入物）和IHC（箭头）的整个静纤毛长度。
（J–L）GRXCR1定位于椭圆黄斑前庭毛细胞静纤毛的长度。前庭上皮中，GRXCR1染色在未成熟的静纤毛束中最为显著（箭头所示）。前庭感觉细胞（箭头，K）的运动细胞中也存在免疫反应性。
比例尺代表5μm。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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图1.来源：Grxcr1突变是Pirouette小鼠内耳功能障碍的基础。

Grxcr1型Pirouette等位基因的耳蜗表达改变
（A）图中显示了基于遗传和序列的组合图，X表示在(圆周率×CAST/EiJ）F1交叉。映射长度以200kb为增量表示。灰色方框表示大小≤0.2 cM的非组合区域（95%置信区间）。除了位于非重组区的两个基因外(Grxcr1型和千立方英尺8)，四个基因位于紧邻的侧翼区域：附件8a1（U75321），Yipf7公司（AF217188），古1（AK084627），以及Gnpda2号机组（AK016785）。每个基因的预测转录方向用箭头表示。染色体的着丝粒（cen）和端粒（tel）取向被指出。
（B） RT-PCR产物从C57BL/6J（B6）对照小鼠的耳蜗RNA和纯合子旋涡突变体中扩增，使用Grxcr1型与第1外显子和第4外显子序列互补的引物（顶面板）或外显子1内的引物Gapdh公司底漆（底部面板）。序列分析表明，从B6 RNA扩增的一个小产物代表了一个缺失外显子2的选择性剪接转录物（箭头所示）。分子尺寸标准的位置在左侧以千碱表示。
（C） RT-PCR产物从C57BL/6J（B6）对照小鼠的耳蜗RNA和纯合子中扩增圆周率^tg370型使用的突变体Grxcr1型与外显子1和2（左）、外显子2和3（中）以及外显子3和4（右）序列互补的引物。还进行了缺乏模板（-）的对照PCR反应，以及使用基因组DNA作为模板的反应。RT表示相应反应中是否存在逆转录酶。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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图2.来源：Grxcr1突变是Pirouette小鼠内耳功能障碍的基础。

内的基因组改变Grxcr1型每个皮罗埃特小巷都有
（A） PCR产物从对照DBA/2J（“D”）和纯合子的基因组DNA中扩增圆周率^2J型小鼠，使用从外显子1上游、紧邻外显子1侧翼和内含子1内的序列设计的引物对（“A”–“E”）。正常基因组DNA中对A和E之间的距离约为200kb，代表突变体中缺失的最大大小。对B和D之间的距离约为175 kb，表示删除的最小大小。内含子1中的缺失断点位于D对之间的9kb区域内（圆周率^2J型DNA）和E（在对照组和圆周率^2J型DNA），外显子2上游约3 kb。分子尺寸标准的位置在左侧以千碱表示。
（B）含有来自对照组（C57BL/6J，B6；CBA/CaJ，CBA）的EcoRV消化基因组DNA和纯合子的Southern blots圆周率^{时间差（tde）}将小鼠与来自第2外显子上游32kb基因组序列的探针杂交（左面板），剥离并与补充时间差（tde）转基因构建（右面板）。箭头表示只有在圆周率^{时间差（tde）}DNA，与插入时间差（tde）将基因转入内含子1的这个区域。
（C）含有来自对照组（C57BL/6J，B6；C3He/FeJ，C3H）和纯合的EcoRI消化基因组DNA的Southern blots圆周率^tg370型将小鼠与来自第2外显子下游25kb基因组序列的探针杂交（左面板），剥离并与补充tg370型转基因构建（右面板）。箭头表示只有在圆周率^tg370型DNA，与插入tg370型将基因转入内含子2的这个区域。
（D）杂种的序列Grxcr1型在受影响患者中检测到的耳蜗转录物圆周率老鼠。顶部序列来自一个3′RACE产物，该产物通过使用来源于Grxcr1组大写核苷酸表示与外显子1的3′端相同。带下划线的核苷酸表示会导致GRXCR1蛋白截短的终止密码子。垂直条代表位于600kb端粒的基因组序列的身份Grxcr1型（底部，端粒到着丝粒方向）。灰色方框表示隐秘的剪接受体信号；还存在相邻的多嘧啶束。
（E）预测的染色体反转的结构圆周率灰色条表示WT背景应变C3H中假定反转断点的相对位置，该断点位于Grxcr1型在大约700kb的端粒区域（参见）。灰色方框表示Grxcr1型开盒代表3′RACE检测到的隐秘外显子。中的反转圆周率等位基因（箭头）会将隐秘的外显子放置在正确的方向，以便包含在带有Grxcr1型，使用所示的AG拼接受体信号。
（F）总结Grxcr1型每个pirouette等位基因的突变。星号表示原中心点反转断点的位置圆周率等位基因。

Hana Odeh等人，《美国人类遗传学杂志》。2010年2月12日；86(2):148-160.

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