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在新分离的卤代烷脱卤酶DbeA的晶体结构中鉴定出两个卤素结合位点埃氏慢生根瘤菌USDA94。消除第二个卤化物结合位点显著改变了酶的底物特异性、催化活性和在氯化物存在下的稳定性。卤代烷脱卤酶突变后底物特异性类别发生了变化,这是首次证明。

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在新分离的卤代烷脱卤酶DbeA的晶体结构中鉴定出两个卤素结合位点埃氏慢生根瘤菌USDA94。消除第二个卤化物结合位点显著改变了酶的底物特异性、催化活性和在氯化物存在下的稳定性。卤代烷脱卤酶突变后底物特异性类别发生了变化,这是首次证明。

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以聚乙二醇4000为沉淀剂,采用悬挂滴气相扩散法结晶卤代烷脱卤酶DbjA。晶体属于正交系,空间群P(P)21212并衍射至1.75º分辨率。

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为了研究酶的功能,构建了两个携带单点和双点突变的卤代烷烃脱卤酶变体LinB32和LinB70,并在不同的结晶条件下结晶。LinB变体及其与卤化底物的配合物的衍射分辨率为1.6至2.8º。

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嗜冷细菌卤代烷脱卤酶DpcA的结构嗜冷核菌K5是一种生物技术应用中很有吸引力的酶,其原子分辨率为1.05 Au。与其他卤代烷脱卤酶相比,该酶具有最短的主通道和狭缝通道。结构比较显示了帽状结构域α4螺旋区域的主要差异,这是隧道特性的决定因素之一。DpcA的结构信息为理解其催化特性奠定了基础,并可以指导这种冷适应酶的修饰以用于各种生物技术应用。

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蒸汽浸泡红色R卤代烷脱卤酶变体DhaA31与1,2,3-三氯丙烷在室温和pH 6.5条件下促进了蛋白质底物复合物的产生。将无底物的DhaA31结构与DhaA31-底物络合物的结构进行比较,揭示了亲核残基Asp106的两种可选构象和卤化物释放的可能途径,而将DhaA31-DhaA与野生型DhaA进行比较,则揭示了活性位点的尺寸减小和溶剂可及性。

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晶体的蒸汽浸泡红色R卤代烷脱卤酶变体DhaA31与1,2,3-三氯丙烷在室温和pH 6.5条件下促进了蛋白质底物复合物的产生。将无底物的DhaA31结构与DhaA31-底物络合物的结构进行比较,揭示了亲核残基Asp106的两种可选构象和卤化物释放的可能途径,而将DhaA31DhaA与野生型DhaA进行比较,则揭示了活性位点的尺寸减小和溶剂可及性。

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在实验室导向的进化活动中,细菌NADH依赖性还原酶(FucO)的底物特异性已通过两步进化途径改变为接受大量芳香底物,其中每一步都由一点突变组成。新变体(DA1472)的酶动力学数据和晶体结构解释了底物特异性的巨大变化。

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来自的DpaA琼脂拟杆菌NO2是一种新型的卤代烷脱卤酶,已被成功纯化和结晶。基于本文报道的晶体学数据的DpaA模型提供了卤代烷脱卤酶亚家族I中四聚体结构的第一个例子。

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