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.1998年11月2日；188（9）：1657-68。
doi:10.1084/jem.188.9.1657。

静息和活化肥大细胞基因表达特征

H Chen先生 1, M Centola公司, S F Altschul公司, H梅茨格
附属机构

静息和活化肥大细胞基因表达特征

H Chen先生等人。 实验医学杂志. .

勘误表in

  • 《实验医学杂志》1998年12月21日；188(12):2387

摘要

为了比以往更全面地表征活化肥大细胞中的基因表达，我们通过对大鼠肥大细胞RBL-2H3系的基因表达进行序列分析的方法，对其通过对免疫球蛋白E（FcepsilonRI）具有高亲和力的受体刺激前后的基因表达变化进行了调查。共分析了来自11300个基因的40759个转录物。在之前未与肥大细胞相关且组成性表达的多种基因中，有细胞因子-巨噬细胞迁移抑制因子-神经激素受体（如生长激素释放因子和褪黑激素）和细胞外机制成分的基因。此外，数十个转录物在FcepsilonRI抗原诱导的聚集反应中差异表达。其中包括前松弛素基因、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶3基因和双特异性蛋白磷酸酶rVH6基因。值得注意的是，在这一经过充分研究的肥大细胞激活模型中，大多数差异表达的基因在分析之前还没有被确定。

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数字

图1
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两个SAGE标记库的组合分析结果。
图2
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转录本及其产物的特征。(A类)通过RT-PCR检测MIF。从大鼠腹腔肥大细胞和巨噬细胞中制备总RNA，并使用大鼠MIF的特异性引物进行RT-PCR。标记（最左边的车道）显示预期大小为550 bp的cDNA产物的位置。(B类)Western blot检测MIF。免疫沉淀物是通过山羊多克隆抗人MIF抗体与下述材料反应制备的，在聚丙烯酰胺凝胶上分离，并用小鼠单克隆抗人MI抗体（lanes）进行印迹1–6)或使用多克隆兔抗鼠MIF抗体（lanes7–9). 车道1、4，和7装载了3×10的裂解物6HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞；车道2, 5,和8含1 ml HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞培养上清液；车道3, 6,和9用1 ml培养HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞的培养基作为对照。(C类)蛋白印迹检测MAPKK3。2×10的裂解液5用抗MAPKK3抗体印迹RBL-2H3细胞。车道1，非刺激性细胞。车道2–5，刺激细胞0.5、3.5、7和16小时。
图2
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转录本及其产物的特征。(A类)通过RT-PCR检测MIF。从大鼠腹膜肥大细胞和巨噬细胞制备总RNA，并使用大鼠MIF的特异性引物用于RT-PCR。标记（最左边的车道）显示预期大小为550 bp的cDNA产物的位置。(B类)Western blot检测MIF。免疫沉淀物是通过山羊多克隆抗人MIF抗体与下述材料反应制备的，在聚丙烯酰胺凝胶上分离，并用小鼠单克隆抗人MI抗体（lanes）进行印迹1–6)或使用多克隆兔抗鼠MIF抗体（lanes7–9). 车道1, 4,和7装载3×10的裂解物6HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞；车道2, 5,和8含1 ml HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞培养上清液；车道3, 6,和9用1 ml培养HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞的培养基作为对照。(C类)蛋白印迹检测MAPKK3。2×10的裂解液5用抗MAPKK3抗体印迹RBL-2H3细胞。车道1，未刺激的细胞。车道2–5，刺激细胞0.5、3.5、7和16小时。
图2
图2
转录本及其产物的特征。(A类)通过RT-PCR检测MIF。从大鼠腹腔肥大细胞和巨噬细胞中制备总RNA，并使用大鼠MIF的特异性引物进行RT-PCR。标记（最左边的车道）显示预期大小为550 bp的cDNA产物的位置。(B类)Western blot检测MIF。免疫沉淀物是通过山羊多克隆抗人MIF抗体与下述材料反应制备的，在聚丙烯酰胺凝胶上分离，并用小鼠单克隆抗人MI抗体（lanes）进行印迹1–6)或使用多克隆兔抗鼠MIF抗体（lanes7–9). 车道1, 4,和7装载了3×10的裂解物6HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞；车道2, 5,和8含1 ml HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞培养上清液；车道3, 6,和9用1 ml培养HMC-1、KU812和RBL-2H3细胞的培养基作为对照。(C类)蛋白印迹检测MAPKK3。2×10的裂解液5用抗MAPKK3抗体印迹RBL-2H3细胞。车道1，非刺激性细胞。车道2–5个，刺激细胞0.5、3.5、7和16小时。
图3
图3
选定基因的Northern印迹。除RMCP-5外，所有病例均制备信使RNA并使用末端标记的15–40-bp寡核苷酸进行Northern印迹；后者使用随机标记的PCR-扩增cDNA。β-肌动蛋白印迹是一种负荷控制。印迹左侧的列列出了在所示基因的静止和激活SAGE库中观察到的标签的拷贝数。MKK3指MAPKK3。
图4
图4
使用特定于选定转录物的引物从静止和激活细胞中扩增mRNA的RT-PCR结果。未测试显示为“nt”的项目。
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