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.1998年10月20日;37(42):14776-87.
doi:10.1021/bi981684e。

连接蛋白组蛋白稳定核小体阵列的固有盐依赖性折叠:高阶染色质折叠的机制分支

附属公司

连接蛋白组蛋白稳定核小体阵列的固有盐依赖性折叠:高阶染色质折叠的机制分支

L M卡拉瑟斯等。 生物化学. .

摘要

由核心组蛋白八聚体和Lytechinus 5S rDNA的12个208 bp串联重复序列(208-12个核小体阵列)重建的定义核小体数组能够在MgCl2中形成不稳定的折叠物种,其压实程度等于标准的高阶直径30 nm的染色质结构[Schwarz,P.M.和Hansen,J。C.(1994)《生物学杂志》。化学。269, 16284-16289]. 为了解决连接体组蛋白在染色质凝聚中的机械功能,在50 mM NaCl中用208-12个核小体阵列组装了纯化的组蛋白H5。随后开发了新的纯化程序,得到208-12个染色质模型系统的制备,其中大多数样品同时包含每5S rDNA重复序列一个组蛋白八聚体和每组蛋白八聚体一个组分H5分子。利用分析超速离心、定量琼脂糖凝胶电泳、电子冷冻显微镜和核酸酶消化,在低盐条件下广泛表征了纯化的208-12染色质的完整性。结果表明,组蛋白H5与208-12核小体阵列结合,以一种产生与天然鸡红细胞染色质无法区分的结构的方式限制了连接子DNA的进出。在NaC1和MgC12中进行的折叠实验表明,H5结合可显著稳定核小体阵列的中间折叠状态和广泛折叠状态,而不会从根本上改变固有的核小体数组折叠路径。这些结果首次证明,形成和稳定高阶染色质结构需要明显不同的大分子决定簇,从而为染色质折叠机制提供了新的见解。

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