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.1998年11月；72(11):9323-8.
doi:10.1128/JVI.72.11.9323-9328.1998。

EBER基因：裂解病毒复制过程中的差异调节

N格雷芬格 1, 梅杰, L A Kunz-Schughart先生, H狼, F施瓦茨曼
附属公司

EBER基因：裂解病毒复制过程中的差异调节

N格雷芬格等。 J维罗尔. 1998年11月.

摘要

在每个潜伏感染EB病毒的细胞中，病毒基因EBER-1和EBER-2通过聚合酶III转录。在体内的溶血感染细胞中，EBER基因无法检测到。然而，在细胞培养中，下调不能被证实，因此这种关闭与病毒复制的相关性尚不清楚。我们用富集的溶血感染细胞通过核连载试验检测了EBER基因的转录活性，并证明在转换为溶血病毒复制期间，EBER-1和EBER-2在转录水平上受到不同程度的下调。这种下调是病毒裂解复制过程中的早期事件。

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数字

图1
图1
各种化学处理诱导的溶血感染P3HR1/13细胞的百分比。用TPA-BA（泳道1、7和13）、IUdR（泳道2、8和14）、TGF-β（泳道3、9和15）、TPA–BA–TGF-β（泳道4、10和16）、IUdR–TGF-β（泳道5、11和17）或TPA–BA–IUdR–TGF-β（泳道6、12和18）处理P3HR1/13细胞，并在24、48和72小时后测定裂解感染细胞的百分比。（A）5×105在每个时间点采集细胞，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting检测蛋白提取物，用单克隆抗体检测Zta和gp350/220。gp350/220特异性单克隆抗体mab-64D7产生了一个双谱带，该双谱带的迁移速度总是比标准谱带快，可能是因为糖基化严重。（B） 免疫荧光分析。显示gp350/220阳性细胞的百分比。（C） 5×105在每个时间点采集细胞，并用gp350/220特异性单克隆抗体mab-64D7进行FACS分析。每组右上象限的细胞被视为阳性；右下象限的人被认为是阴性的。左面板：C1，未经处理的DG75；C3，潜伏P3HR1/13；右侧面板：C2，化学处理DG75；C4，处理过的P3HR1/16。gp350/220阳性细胞的百分比显示在面板中。这个x个轴表示前向光散射（FSC）；这个年轴表示gp350/220特异荧光（FL1）的强度。
图2
图2
纯化溶血感染的gp350/220阳性P3HR1/13细胞。用TPA–BA–TGF-β处理P3HR1/13细胞72小时。根据制造商的说明，用gp350/220特异性小鼠单克隆抗体mab-64D7标记溶血感染的细胞，并用顺磁珠（MACS系统）纯化，包被次级抗鼠抗体。每组右上象限的细胞被视为阳性；右下象限的细胞被认为是阴性的。（A） P3HR1细胞诱导72小时后、纯化前和（B）纯化gp350/220阳性细胞后。（C） DG75细胞诱导72小时后、纯化前和（D）纯化gp350/220阳性细胞后。面板中显示了gp350/220阳性细胞的百分比。这个x个轴表示前向光散射（FSC）；这个年轴表示gp350/220特异荧光（FL1）的强度。
图3
图3
通过核运行实验分析潜伏和溶解感染细胞系中的病毒基因活性。用TPA–BA–TGF-β处理Akata、B95-8、Raji、P3HR1/16和P3HR1/13细胞系（此处未显示）72小时，以诱导EBV的裂解复制。72小时后，纯化细胞核并进行核试运行实验。将反映实际基因活性的放射性标记RNA与几个固定化的基因特异性DNA探针杂交，最后将膜暴露在X射线胶片上。基因特异性探针：通道1，组蛋白H3；车道2，EBNA-2；车道3，LMP-1；车道4，EBER-1；车道5，EBER-2；6号车道，BRLF-1（Rta）；第7车道，BZLF-1（Zta）；BALF-2（EA）第8车道；第9车道，BcLF-1（VCA）。（A） 化学诱导前的细胞。（B） 细胞诱导72小时后，纯化前。（C） 细胞诱导72小时后，纯化gp350/220阳性细胞。（D） 用抗免疫球蛋白G诱导Akata细胞72小时后，未经纯化。（E） 在PAA存在下用TPA–BA–TGF-β诱导72小时后，P3HR1/16细胞抑制病毒DNA复制。
图4
图4
通过Northern blot分析定量潜伏和溶血感染的P3HR1/13细胞中的EBER转录物。用TPA–BA–TGF-β处理Akata、B95-8、P3HR1/16和P3HR1/13细胞系72小时，以诱导EBV的裂解复制。72小时后，纯化总RNA并进行Northern印迹实验。固定化RNA与（A）EBER-1-特异性、（B）EBER-2-特异性或（C）组蛋白H3特异性（RNA对照）放射性标记探针进行杂交。细胞系：Akata的1号和6号通道；车道2和7，B95-8；车道3和8；P3HR1/13；4号和9号车道，P3HR1/16。通道1至5：潜伏细胞；通道6至9：经过化学处理的细胞。
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