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.1998;4(2):75-83.
doi:10.1053/bbmt.1998.v4.pm9763110。

CD20是scFvFc的分子靶点:zeta受体导向的T细胞:CD20+恶性肿瘤细胞免疫治疗的意义

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CD20是scFvFc的分子靶点:zeta受体导向的T细胞:CD20+恶性肿瘤细胞免疫治疗的意义

M延森等。 生物骨髓移植. 1998.
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摘要

CD20分子被评估为表达CD20特异性单链FvFc-zeta(scFvFc:zeta)嵌合受体的T细胞的B细胞淋巴瘤靶表位。通过聚合酶链反应剪接-重叠延伸法合成了一个cDNA构建物,该cDNA由小鼠kappa先导序列、CD20特异性单链抗体、人免疫球蛋白(Ig)G1 hinge-C(H)2-C(H)3、人CD4跨膜和人CD3复合体zeta链的胞内信号域组成。用克隆到哺乳动物表达载体pcDNAneo中的CD20特异性scFvFc:zeta构建物对人CD4+Jurkat细胞系进行电穿孔。用抗zeta抗体对转染的全细胞裂解液进行Western blot分析,结果表明内源性zeta和嵌合受体蛋白均表达,在还原条件下,迁移率与预期的66kD分子量一致;未还原的裂解物显示约132kD的嵌合受体复合物。用抗鼠Fab特异性抗体和抗人Fcγ特异性单克隆抗体染色的T细胞转染体的流式细胞术检测到细胞表面存在scFvFc:zeta受体。ELISA检测到,Jurkat转染物与CD20+淋巴瘤细胞共培养导致培养上清中白细胞介素(IL)-2的积累。CD20分子和scFvFc:zeta之间的特异性相互作用触发了IL-2的产生,因为在模拟转染Jurkat细胞或CD20刺激细胞的培养物中未检测到IL-2。此外,通过向共培养的Jurkat转染子和CD20+刺激细胞中添加可溶性抗CD20单克隆抗体来抑制IL-2的产生。使用小鼠同种特异性CD8+CTL克隆2c评估CD20触发scFvFc裂解机制的能力:zeta表达的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。在4小时铬释放试验中,使用2c转染剂观察到CD20特异性重定向细胞溶解人类淋巴瘤靶点的活性。这些结果表明CD20可以作为scFvFc:zeta受体表达T细胞的靶表位。

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