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.1998年10月2日;273(40):25864-74.
doi:10.1074/jbc.273.40.25864。

酿酒酵母脂肪酸活化蛋白4在蛋白质N-肉豆蔻酰化进入固定相过程中的调节作用

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酿酒酵母脂肪酸激活蛋白4在进入固定相过程中调节蛋白N-肉豆蔻酰化的作用

K阿什拉菲等。 生物化学杂志. .
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摘要

酿酒酵母含有四种已知的酰基辅酶A合成酶(脂肪酸活化蛋白,Faaps)。Faa1p和Faa4p激活外源性脂肪酸。酰基辅酶a代谢在必需酶肉豆蔻酰辅酶a:蛋白质N-肉豆蔻酰基转移酶(Nmt1p)调节蛋白质N-肉豆酰化中起着关键作用。在本报告中,我们研究了Faa1p和Faa4p在营养剥夺(静止期)期间,当细胞从富培养基中生长转变为生长停滞状态时,是否在影响蛋白质N-肉豆蔻酰化中起着不同的作用。10个等基因菌株的集落形成潜能被定义为在固定相花费时间的函数。这些菌株包含野生型或突变型NMT1等位基因,以及每个FAA的野生型或无效等位基因。只有Nmt突变体(nmt451Dp;对肉豆蔻酰辅酶a的亲和力降低)和Faa4p的缺失导致了结肠形成单位(CFU)的急剧丢失。CFU的逐渐百万倍减少与蛋白质N-肉豆蔻酰化缺陷有关,该缺陷首先出现在对数生长期,在双脱氧期后恶化,在稳定期变得极端。Northern和Western blot分析加上N-肉豆蔻酰转移酶分析表明,Nmt通常仅在对数期和双数期/双数期后出现,表明稳定期出现的N-肉豆杉酰蛋白是从这些早期阶段“遗传”来的。此外,FAA4是在关键性双脱位/双脱位后早期过渡期间诱导的唯一FAA。虽然nmt1-451D替代nmt1会导致蛋白质N-肉豆蔻酰化缺陷,但这些缺陷是适度的,并受到补偿反应的限制,包括nmt1-451 D的增强表达和对数期FAA4的早熟诱导。nmt1-451D细胞中Faa4p的缺失严重影响了其在进入固定相之前对Nmt底物进行肉豆蔻酰化的能力,因为其他Faaps都无法对其缺失进行功能补偿。为了确定可能影响稳定期增殖潜能维持的Nmt1p底物,我们在酵母基因组中搜索已知和推测的N-肉豆蔻酰蛋白。在发现的64个基因中,有48个在NMT1细胞中被成功删除。去除以下九种底物中的任何一种产生CFU的损失,类似于在nmt1-451Dfaa4Delta细胞中观察到的CFU的损失:Arf1p、Arf2p、Sip2p、Van1p、Ptc2p、YBL049W(与Snf7p同源)、YJR114W、YKR007W和YMR077C。这些蛋白质提供了进一步定义稳定期内调节存活的分子机制的机会。

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