跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.1998年4月28日；95(9):4997-5002.
doi:10.1073/pnas.95.9.4997。

Bax直接诱导线粒体释放细胞色素c

于尔根斯梅尔 1, Z Xie（音译）, Q德芙罗, L埃勒比, D布雷德森, J C里德
附属公司

Bax直接诱导线粒体释放细胞色素c

J Mürgensmeier先生等。 美国国家科学院程序. .

摘要

Bax是位于线粒体外膜的Bcl-2蛋白家族的促凋亡成员。Bax是通过其作为通道蛋白的假定功能直接促进细胞死亡，还是通过抑制细胞死亡蛋白酶（caspases）的细胞调节器间接促进细胞死亡。我们在这里表明，向分离的线粒体中添加亚摩尔数量的重组Bax蛋白可以诱导细胞色素c（Cyt c）释放，而代表Bax BH3结构域的肽是不活跃的。当放入纯化的细胞液中时，线粒体和Bax均未单独诱导蛋白水解过程和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的激活。相反，Bax和线粒体的结合触发了线粒体Cyt c的释放，并诱导了胞浆中caspase的激活。Bax处理线粒体的上清液也诱导caspase的处理和激活。重组Bcl-XL蛋白可消除Bax诱导的线粒体Cyt c释放，并阻止caspase激活。相反，广谱caspase抑制剂苄氧羰基-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-（0-甲基）-氟甲基酮（zVAD-fmk）和caspase抑制蛋白X-IAP对Bax诱导的体外线粒体Cyt c释放没有影响，但阻止了胞质提取物中caspase的后续激活。与线粒体通透性转变的经典诱导剂Ca2+不同，Bax在体外不会诱导线粒体肿胀。由于通透性转变引起的细胞器肿胀导致外膜破裂，因此，研究结果将这两个事件分离开来，这意味着Bax使用另一种机制触发线粒体释放Cyt c。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
Bax诱导Cytc（c）从分离的线粒体中释放A类，线粒体在30°C下与1μM Bax、150μM Ca孵育1小时2+两种或两种试剂都没有。然后通过离心法造粒线粒体，并使用抗Cyt抗体对所得上清液进行SDS/PAGE免疫印迹分析c（c）抗体。在每次实验中，通过使用完整内膜蛋白F的抗体对颗粒和上清液组分进行免疫印迹分析，验证线粒体的完整丸化和输入等量的线粒体1-β-ATPase（车道7和8，未显示数据）。作为对照，还用0.2%（vol/vol）的Triton X-100处理线粒体，其释放所有Cytc（c）来自这些细胞器。数据代表了使用3种Bax蛋白独立制剂进行的12次以上实验。在B类用5μg pcDNA3或pcDNA3-Bax转染293T细胞。1天后收集细胞，处理以获得细胞溶质和细胞器（颗粒）亚组分，并使用Cyt特异性抗体通过SDS/PAGE分析等分（25μg总蛋白）c（c）β-肌动蛋白（细胞溶质蛋白）和F1-β-ATPase（线粒体基质蛋白）。否F1-在细胞溶质部分检测到β-ATPase（数据未显示）。在C类，线粒体同样与不同浓度的重组Bax蛋白和Cyt孵育c（c）通过免疫印迹法（代表两个实验）测量释放。在D类，线粒体与1μM Bax蛋白、50μM BH3肽或两者均不与这些试剂孵育。塞浦路斯c（c）如上所述，1小时后测量释放(n个= 2).
图2
图2
Bax诱导线粒体因子的释放，触发细胞溶质半胱天冬酶的处理和激活。在A类将线粒体的上清液与1μM Bax或稀释液对照（C）孵育1小时后添加到纯化的胞浆中。或者，将1μM Bax或稀释剂对照直接添加到细胞液中。在30°C培养0.5小时后，通过DEVD-AFC水解测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性。数据表示每次释放的AFC的微摩尔量，其中样品的总细胞溶质蛋白含量进行了标准化。在B类，将线粒体添加到含有或不含1μM Bax的细胞溶质提取物中。在30°C下孵育1小时后，通过离心将线粒体制成颗粒，并在产生的上清液中测量caspase活性。在C类，通过使用抗Cyt对细胞溶质级分的等分试样进行SDS/PAGE免疫印迹分析c（c）抗体。作为附加控制(左侧)，胞浆用10μM Cyt处理c（c），如所述（25）。闭合箭头和开放箭头分别表示caspase-3的未加工酶原和与活性酶相关的加工形式。
图3
图3
Bax不诱导线粒体通透性转变。将线粒体放入试管中，在520 nm处使用双光束分光光度计测量吸光度。在某些情况下，样品用10μM CsA进行预处理。1μM Bax或150μM Ca2+添加（箭头所示），并在随后的75分钟内监测光密度（代表五个实验的数据）。
图4
图4
Bcl-X的影响L（左）、CsA和zVAD-fmk对Bax诱导的Cyt释放的影响c（c）用1μM Bax或稀释剂对照（C）处理线粒体（有时重复），无论是否使用其他试剂，以及Cytc（c）1小时后通过免疫印迹法测定上清液中的释放。在A类，12μM Bcl-XL（左）如图所示，与Bax同时添加到一些样品中。在B类在Bax前5分钟添加10μM CsA或10μM zVAD-fmk。在C类除上清液（25μg）外，还分析了线粒体颗粒。用抗Bax抗体通过SDS/PAGE免疫印迹分析测定Bax与线粒体的结合。
图5
图5
Bcl-X公司L（左）抑制Bax和线粒体诱导的caspase-3的处理。将线粒体添加到细胞溶质提取物中，然后添加1μM Bax或稀释剂对照（C），添加或不添加不同浓度的Bcl-XL（左）蛋白质或zVAD-fmk。通过离心法去除线粒体后，通过SDS/PAGE免疫印迹法分析小份细胞液，并用caspase-3抗体进行特异性分析(上部)或Cytc（c）(下部). 图中显示了caspase-3的未加工原型（填充箭头）和caspase-2的加工≈17-kDa大亚基（开放箭头）的位置。稍慢的迁移带代表半胱天冬酶-3大亚基的部分加工形式（25，51）。
图6
图6
Bcl-X的影响L（左）和CsA对Bax+线粒体诱导的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶激活的影响。细胞溶胶在30°C下用线粒体、1μM Bax、稀释剂对照（C）或在有或无(A类)3–12μM Bcl-XL（左）或(B类)10μM CsA。通过DEVD-AFC水解测定半胱氨酸天冬氨酸酶活性。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Reed J C.J细胞生物学。1994;124:1–6.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Krajewski S、Tanaka S、Takayama S、Schibler M J、Fenton W、Reed J C.癌症研究1993；53:4701–4714.-公共医学
    1. González Garcia M、Pérez Ballestero R、Ding L、Duan L、Boise L、Thompson C、Nœñez G.Development（英国剑桥），1994年；120:3033–3042.-公共医学
    1. Hirsch T，Marzo I，Kroemer G.Biosci Rep.1997；17:67–76.-公共医学
    1. Yang J、Liu X、Bhalla K、Kim C N、Ibrado A M、Cai J、Peng I-I、Jones D P、Wang X.Science。1997;275:1129–1132.-公共医学

出版物类型

MeSH术语