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.1998年3月3日;95(5):2603-8.
doi:10.1073/pnas.95.5.2603。

Bcl-xL保护成人隔胆碱能神经元免受轴切细胞死亡

附属公司

Bcl-xL保护成人隔胆碱能神经元免受轴切细胞死亡

U Blömer公司等。 美国国家科学院程序. .

摘要

Bcl-xL在体外抑制细胞系中由不同刺激诱导的凋亡细胞死亡。为了研究轴切胆碱能神经元在体内死亡的机制,在穹窿伞横断前3周将表达Bcl-xL、人神经生长因子(hNGF)或绿色荧光蛋白的慢病毒载体注射到隔中。横断术后三周,注射Bcl-xL-和hNGF-的动物与注射对照(绿色荧光蛋白)的动物相比,剩余胆碱能神经元的数量显著增加。这些结果提供了证据,证明成年轴切胆碱能神经元死于凋亡性死亡,可通过局部递送hNGF或细胞内递送Bcl-xL来预防。

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数字

图1
图1
PC12细胞存活和分化的免疫细胞化学。()PC12细胞在与hNGF分化后死亡,随后被剥夺血清和hNGF。当感染编码Bcl-xL的慢病毒载体时,用hNGF分化的PC12细胞再存活3周(B类)(酪氨酸羟化酶染色为蓝色)。未用hNGF分化且无血清的PC12细胞在3天后死亡(C类). 然而,感染含有Bcl-xL的载体的PC12细胞表达Bcl-xL(绿色)和酪氨酸羟化酶(蓝色),并存活7天(D类).
图2
图2
通过间隔区对冠状断面进行免疫组织化学染色。共聚焦显微图像显示体内表达神经元标记物(NeuN;红色)、胆碱能标记物(ChAT;蓝色)和hNGF或Bcl-xL转基因(hNGF/Bcl-xL;绿色)的成年大鼠隔神经元的转导。显示了从每个染色和合并图像中获得的图像。注射部位周围区域的代表性区域显示有几个细胞,分别标记为hNGF、NeuN和ChAT,以及Bcl-xL、NeuM和ChAT。
图3
图3
hNGF、Bcl-xL或GFP载体注射或生理盐水对照注射6周后,以及注射同侧穹窿伞单侧吸气性损伤3周后,通过内侧隔的冠状切片(50μm)染色以检测ChAT免疫反应。内侧隔的定义是位于胼胝体下方前连合中段之间的一条线上,并由心室横向限制的区域。对病变部位和非病变部位显示圆形胞体和至少一个突起的ChAT阳性细胞进行计数。
图4
图4
间隔内载体注射和穹窿伞损伤后对同侧/对侧间隔神经元的百分比进行量化。显示hNGF-、Bcl-xL-和GFP-表达载体和盐水对照的ChAT-免疫活性细胞百分比(平均值±SEM)。hNGF和Bcl-xL病毒载体注射动物与GFP病毒载体或盐水注射对照动物相比,胆碱能间隔神经元存活数量显著增加(*,P(P)<0.05,方差分析,Fischer事后检验)。
图5
图5
体内hNGF和Bcl-xL在神经元存活中的作用模型。通过慢病毒载体在靶细胞和邻近的神经胶质细胞和神经元细胞中获得hNGF和Bcl-xL的慢病毒转移和表达。稳定表达的Bcl-xL位于线粒体和核膜的靶细胞内;然而,它不是分泌的。只有受感染的胆碱能神经元才能通过Bcl-xL的过度表达干扰细胞死亡级联反应,从而在轴切断术诱导的细胞死亡和营养因子退出中存活。周围细胞对细胞存活没有贡献,因此,细胞保存量低于hNGF过度表达所获得的细胞保存量。hNGF以分泌蛋白的形式由目标神经元和邻近的胶质细胞和神经元细胞表达;靶细胞上的自分泌和旁分泌效应使hNGF能够保存更多的细胞。

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引用人

工具书类

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