An avirulent mutant of rabies virus is unable to infect motoneurons in vivo and in vitro

doi:10.1128/JVI.72.1.273-278.1998

.1998年1月；72(1):273-8.

doi:10.1128/JVI.72.1.273-278.1998。

狂犬病病毒无毒突变株在体内外均不能感染运动神经元

P库隆¹, J P Ternaux公司, 弗拉芒, C塔夫罗

附属公司

PMID： 9420224
预防性维修识别码：项目编号：109373
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.72.1.273-278.1998

狂犬病病毒无毒突变株在体内和体外均不能感染运动神经元

P库隆等。 J维罗尔. 1998年1月.

.1998年1月；72(1):273-8.

doi:10.1128/JVI.72.1.273-278.1998。

作者

P库隆¹, J P Ternaux公司, 弗拉芒, C塔夫罗

附属

¹法国伊夫特河畔吉夫国家科学研究中心病毒实验室。

PMID： 9420224
预防性维修识别码：项目编号：109373
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.72.1.273-278.1998

摘要

狂犬病病毒的抗原双突变体（挑战病毒标准株[CVS]）是通过连续使用两种中和抗糖蛋白单克隆抗体来选择的，这两种抗体都对抗原位点III具有特异性。该突变体与原始病毒株的不同之处在于糖蛋白外结构域中的两个氨基酸替换。位置330的赖氨酸和位置333的精氨酸分别被天冬酰胺和蛋氨酸取代。这种双突变体对成年小鼠没有致病性。当肌肉注射到成年小鼠的前肢时，该病毒不能通过运动或感觉途径渗透神经系统，而相应的单个突变体感染了脊髓运动神经元和背根神经节的感觉神经元。体外实验表明，双突变体能够感染BHK细胞、神经母细胞瘤细胞和新制备的胚胎运动神经元，尽管其效率低于CVS菌株。在37摄氏度下进一步孵育后，运动神经元对突变体的感染具有抵抗力，同时对CVS感染保持宽容。这些结果表明，狂犬病病毒使用不同类型的受体：一种在连续细胞系表面普遍表达并被CVS和双突变体识别的分子，以及一种不被双突变体识别的神经元特异性分子。

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数字

图1
狂犬病病毒和狂犬病相关病毒Mokola病毒（26）的实验室和野生型毒株中抗原位点III的保存。显示了固定毒株CVS（32）、ERA（1）、SAD（5）和巴斯德病毒（PV）（27）以及野生毒株CGX89-1（2）、COSRV（14）、T5-A1（16）和阿尔及尔（4）的序列。本研究确定了K4-5序列。带正电的氨基酸用粗体表示，并带有下划线。糖基化位点和脯氨酸被装箱。

图2
BSR（--）和NG108-15（––）细胞上CVS（⧫）和K4-5（•）的一步生长曲线。MOI为5（CVS）和6（K4-5）。在室温下吸附1小时后，去除接种物，并在添加培养基之前清洗细胞层。4小时后更换上清液，以清除脱附病毒。培养温度为37°C。感染后感染。

图3
纯化培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元。（a）分离的运动神经元培养物生长在涂有聚乙烯的玻璃盖玻片上-我-在含有添加剂的DMEM-F12培养基中，赖氨酸（0.005%）和层粘连蛋白（0.001%）。电镀后6天，用相差显微镜观察活细胞。（b）多聚甲醛固定后运动神经元同一培养物中乙酰胆碱的免疫过氧化物酶检测。棒材，15μm。

图4
CVS或抗原双突变体K4-5培养10天后大鼠胚胎脊髓运动神经元感染。将细胞接种在用聚乳酸处理的玻璃盖玻片上-我-赖氨酸和层粘连蛋白，保存10天，然后用CVS（A和B）或K4-5（C和D）感染24小时。在用双标记免疫荧光法同时检测神经元（A和C）和病毒抗原（B和D）之前，将培养物固定并渗透。棒材，30μm。

图5
大鼠胚胎脊髓运动神经元在体外获得了对突变型K4-5感染的渐进抗性。运动神经元接种在聚乙烯上-我-密度为3×10的赖氨酸和层粘连蛋白处理玻璃盖玻片⁴至3×10⁵每个盖玻片的细胞数，具体取决于培养时间。他们在第2天、第6天或第10天在37°C下用CVS或K4-5感染24小时。固定和渗透后，用抗MAP2小鼠单克隆抗体鉴定神经元，用兔抗狂犬病病毒核衣壳抗体检测感染细胞。受感染运动神经元的百分比估计为双标记细胞数量与MAP2标记细胞数量的比率（从10^三地图2⁺细胞计数）。实验一式四份。

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[10] Benmansour A、Leblois H、Coulon P、Tuffereau C、Gaudin Y、Flamand A、Lafay F。狂犬病病毒糖蛋白的抗原性。《维罗尔杂志》。1991;65:4198–4203.-项目管理咨询公司-公共医学

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