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.1997年9月;11(11):905-15.
doi:10.1096/fasebj.11.11.9285489。

从全能胚胎干细胞到自发收缩平滑肌细胞:维甲酸和db-cAMP体外分化模型

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从全能胚胎干细胞到自发收缩平滑肌细胞:维甲酸和db-cAMP体外分化模型

M单调等人。 美国财务会计准则委员会J. 1997年9月.

摘要

血管平滑肌细胞(VSMC)分化对了解血管疾病很重要;然而,目前尚无体外模型。用全能小鼠胚胎干细胞(ES)建立这种模型。为了测试ES细胞衍生的平滑肌细胞是否表达VSMC特异性特性,通过1)形态学分析,2)基因表达,3)VSMC特异蛋白的免疫染色,4)特征性VSMC离子通道的表达,以及5)[Ca2+]的形成来表征分化的细胞i对VSMC特异性激动剂的瞬态反应。用维甲酸和二丁酰环腺苷一磷酸(db-cAMP)处理胚胎干细胞衍生的类胚体,可诱导67%的类胚体内自发收缩的细胞簇分化,而对照组为10%。当在第7天至第11天将视黄酸和db-cAMP应用于胚状体并频繁改变培养基时,观察到最高的分化率。其他使用维甲酸和db-cAMP的方案,以及单独或联合使用VEGF、ECGF、bFGF、aFGF、纤维连接蛋白、基质凝胶或低氧治疗均不影响分化率。单细胞RT-PCR和PCR产物测序确定了区分肠道和VSMC亚型的肌球蛋白重链(MHC)剪接变体。用VSMC特异性MHC引物进行RT-PCR和免疫染色证实了VSMC转录物和MHC蛋白的存在。此外,表达MHC的VSMC具有典型的离子通道,并通过增加[Ca2+]i对特异性激动剂作出反应。在这里,我们提出了一种体外血管生成的视黄酸+db-cAMP诱导的胚胎干细胞模型。表达VSMC特异性MHC和功能性VSMC特性的ES细胞衍生细胞可能是研究VSMC分化机制的合适系统。

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