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.1997年5月23日;272(21):13829-34。
doi:10.1074/jbc.272.21.13829。

非离子洗涤剂在Bcl-2家族成员中诱导二聚体

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非离子洗涤剂在Bcl-2家族成员中诱导二聚体

Y T Hsu先生等。 生物化学杂志. .
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摘要

Bcl-2家族成员(包括Bcl-2、Bcl-XL和Bax)在细胞凋亡的调节中起着关键作用。这些蛋白被认为是膜相关的,并被提议通过同二聚体和异二聚体来调节细胞凋亡。我们发现,虽然如前所述,Bcl-2主要与膜相关,但大量的Bcl-XL和大多数Bax蛋白不是膜相关,因此出现在胸腺细胞和脾细胞提取物的细胞溶质部分。这一发现允许在没有洗涤剂干扰的情况下研究这些蛋白质的二聚化性质和构象。为了进行这项分析,我们生产了对已知Bax、Bcl-2和Bcl-XL表位具有特异性的单克隆抗体。氨基酸12和24之间的N末端表位(α-uBax 6A7)抗体无法结合Bax的可溶性细胞溶质形式,表明该表位通常被埋藏。非离子洗涤剂改变Bax构象以暴露该表位。在非离子洗涤剂存在下,6A7抗体贪婪地结合Bax的单体形式,而不是与Bcl-XL或Bcl-2络合的Bax。相反,氨基酸3-16中Bax相邻表位(α-mBax 5B7)的单克隆抗体可结合Bax的可溶性和洗涤剂改性形式,也可结合Bax。Bcl-XL或Bax。Bcl-2复合物。令人惊讶的是,在没有洗涤剂的情况下,Bax无法与Bcl-XL形成同二聚体或异二聚体。这些结果表明,Bcl-2家族成员在生理条件下具有一种新的构象状态,这与形成二聚体的洗涤剂替代状态不同,目前认为这种状态可以调节细胞凋亡。

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