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.1997年3月18日;94(6):2392-7.
doi:10.1073/pnas.94.6.2392。

热休克因子2在小鼠胚胎发生中的作用及调控

附属机构

热休克因子2在小鼠胚胎发生中的作用及调控

M Rallu先生等人。 美国国家科学院程序. .

摘要

许多动物物种在发育过程中都有热休克基因的自发表达的记录,但对这种发育调控的机制了解甚少。在脊椎动物中,与参与应激反应的热休克因子1(HSF1)不同的其他热休克转录因子被认为参与了这种发育控制。特别是,已发现小鼠HSF2在睾丸和着床前发育期间活跃。然而,由于缺乏关于HSF2在发育过程中表达的数据,HSF2的作用及其激活机制仍然难以捉摸。在本研究中,我们检测了小鼠植入后发育阶段HSF2的表达。我们的数据显示HSF2的发育调控,至少在胚胎发生15.5天之前表达。在妊娠的后半期,它仅限于中枢神经系统。它在含有有丝分裂活性细胞的神经管心室层表达,但在有丝分裂后的神经元中不表达。在mRNA、蛋白质和活性水平方面获得了平行结果,表明主要的控制水平是转录水平。对hsp70.1启动子控制下荧光素酶报告基因活性的详细分析以及中枢神经系统中主要热休克蛋白的蛋白表达模式的描述表明,HSF2和热休克蛋白表达域不一致。这一结果表明,HFS2可能参与其他调节性发育途径,并为新的功能方法铺平了道路。

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数字

图1
图1
用凝胶位移法检测植入后胚胎的HSE结合活性。Emb,E8.5或E9.5时的整个胚胎;r.emb,胚胎中未被切除的部分;YS,卵黄囊;Tel,端脑小泡;FL,前肢;HL,后肢;T、 尾芽。(A类)将解剖结构的提取物(27μg)与32用于凝胶位移分析的P标记双链HSE2寡核苷酸。箭头指向特定的移位复合体。非特定复合物被括在括号内。未显示游离DNA。(B类)特定位移络合物的荧光成像仪定量结果。胚胎提取物的信号强度报告为F9对照细胞提取物中密度值的百分比。
图2
图2
多克隆抗体对植入后胚胎提取物形成的特定HSE复合物的影响。E11.5胚胎端脑或尾部或F9对照细胞(F9C)的提取物(27μg)在与HSF1(α1)或HSF2(α2)或无抗体(−)的多克隆抗体孵育前预先孵育32P标记的双链HSE2寡核苷酸和凝胶位移分析。箭头指向特定复合物,箭头指向非特定复合物(ns)。
图3
图3
植入后胚胎HSF2分布的Western blot分析。F9C,F9对照细胞提取物。左箭头表示HSF2剪接亚型;右箭头表示80kDa的分子量标记。
图4
图4
植入后发育期间的HSF2 ISH。100–250μm厚的E9.5截面(A类),E12.5(B类——D类)和E15.5(E类——小时)胚胎与地高辛标记的反义或正义杂交(C类,F类、和小时)HSF2探头。(A类)E9.5胚胎的矢状面切片;HSF2在除躯干间质外的整个胚胎中表达。箭头指向HSF2高度表达的结构(见正文)。(B类——D类)在中脑水平上解剖的E12.5神经管的冠状切片(B类C类)或脊髓(D类). 表达域映射到神经管的增殖区域。请注意,顶板区域(rp)未染色。(E类F类)E15.5胚胎的矢状面切片显示HSF2表达显著衰退。弱染色仅在不同发育的脑泡和脊髓中检测到。(小时)E15.5神经管的冠状切片(脊髓水平)显示弥漫低标记。D、 背侧;Di,间脑;Fb,前脑;血红蛋白,后脑;LV3,中脑囊泡;LV4,第四心室;Mb,中脑;Mes,中脑;Met,后脑;ML,地幔层;rp,顶板;SC,脊髓;电话,端脑;tm,树干间充质;五、 腹侧;VZ,心室区。(巴=500μm)
图5
图5
HSP70.1荧光素酶转基因胚胎组织中的荧光素酶活性。每个值都是用三个胚胎进行的测量的平均值。胚胎之间的差异小于20%。
图6
图6
E12.5胚胎中枢神经系统内主要HSPs和HSF2基因表达的比较分布图。(A类——E类)E12.5中脑水平神经管冠状冰冻切片HSPs的免疫学检测。切片用抗HSP90α孵育(A类),抗HSC70(B类),抗HSP90β(C类),或抗HSP25(D类). (E类)用地高辛标记的HSF2反义核糖探针在200μm厚冠状切片上进行ISH,在中脑Cb、小脑水平进行;其他缩写与图4中的缩写相同。

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引用人

工具书类

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