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.1996年6月;1(6):569-79.
doi:10.1046/j.1365-2443.1996.d01-261.x。

利用转染的cDNA或RNA启动仙台病毒增殖

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利用转染的cDNA或RNA启动仙台病毒增殖

加藤等。 基因细胞. 1996年6月.
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摘要

背景:单核病毒超家族(Mononegavirales)由三个家族组成,即病毒科、副粘病毒科和丝状病毒科。这些病毒具有单链负义RNA作为基因组。最近,从包括仙台病毒(一种原型副粘病毒)在内的单核病毒转染cDNA中回收感染性病毒的成功,为其基因工程开辟了可能性,只有通过cDNA引导抗原正义(+)RNA的合成来启动感染循环,才能恢复感染性病毒。从基因组负义(-)RNA开始并不成功。此外,回收效率往往极低。

结果:我们在这里描述了一种类似的系统,该系统允许从细胞中高速回收仙台病毒,其中转染的cDNA和支持病毒核衣壳蛋白和RNA聚合酶合成的质粒通过痘苗病毒驱动的噬菌体T7聚合酶共表达。我们的系统能够从不仅引导(+)RNA而且引导(-)RNA的cDNA中回收病毒。此外,使用该系统,我们通过转染体外合成的(+)RNA或(-)RNA成功地回收了病毒。这种改进的病毒回收似乎是通过以最佳比例提供支持质粒以及通过特定抑制剂最小化痘苗病毒的细胞病变影响来实现的。此外,构建我们的cDNA以生成病毒真正的RNA,而无需在5'端添加T7启动子特异性核苷酸,这可能是至关重要的。通过在病毒融合糖蛋白的裂解激活位点产生预定衰减突变的候选疫苗株,证明了该系统的立即应用。

结论:我们已经建立了大大提高仙台病毒cDNA回收率的方法。从(-)RNA模板中回收病毒基本上没有绝对障碍。即使是裸露形式的完整全长RNA链似乎也被适当封装成功能模板。

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