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.1997年2月18日;36(7):1719-29.
doi:10.1021/bi962317a。

固醇载体蛋白-2脂肪酸结合位点:核磁共振、圆二色谱和荧光光谱测定

附属机构

固醇载体蛋白-2脂肪酸结合位点:核磁共振、圆二色谱和荧光光谱测定

N J斯托维奇等人。 生物化学. .

摘要

利用核磁共振(NMR)、圆二色性(CD)和荧光技术研究了脂肪酸与重组人固醇载体蛋白-2(SCP-2)的相互作用和取向。硬脂酸和油酸的13C-NMR光谱以及顺式丙酸的荧光光谱表明,SCP-2以接近1:1的化学计量比结合天然存在的脂肪酸。一些研究结果表明,脂肪酸定位于结合位点,其甲基末端埋藏在蛋白质内部,羧酸暴露在表面:结合[18-13C]-硬脂酸的化学位移;二羧酸/一羧酸顺式-肝素酸置换;中性pH下SCP-2结合[1-13C]硬脂酸盐羧酸基团的完全电离;13C-脂肪酸与SCP-2阳离子残基之间缺乏静电相互作用:SCP-2结合的[1-13C]硬脂酸羧酸盐的pH滴定性。SCP-2在配体结合或pH值降低时没有发生整体结构变化,这表明核磁共振没有显著变化,时间分辨荧光参数只有微小变化。然而,CD在5-6的pH范围内检测到SCP-2确实发生了二次结构变化。虽然二级结构的这些变化并没有改变脂肪酸:SCP-2结合化学计量比,但在较低的pH值下,脂肪酸的亲和力增加了几倍。总之,13C-NMR、CD、,和荧光光谱提供了对脂肪酸与SCP-2相互作用的详细了解,并首次显示了脂肪酸在结合位点内的取向。pH诱导的SCP-2二级结构和配体结合活性的变化可能对该蛋白与膜表面相互作用以增强脂质结合/转移的机制很重要。

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