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.1997年1月31日;1323(2):173-84.
doi:10.1016/s0005-2736(96)00189-7。

Ehrlich腹水肿瘤细胞谷氨酰胺酶的线粒体下定位和膜地形图

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Ehrlich腹水肿瘤细胞谷氨酰胺酶的线粒体下定位和膜地形图

J C阿莱多等。 Biochim生物物理学报. .
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摘要

用线粒体亚分馏研究、不同渗透性巯基试剂的化学修饰、线粒体内膜两侧的酶消化、,和免疫学研究。采用高离子强度碱性萃取、低渗透冲击和冷冻-解冻循环技术,在颗粒物中发现了酶。相反,当用洋地黄素/鲁布罗法进行亚分馏时,谷氨酰胺酶活性不稳定;Western blot分析将失活酶定位在基质部分。此外,当有丝分裂体与磷脂酶A2和磷脂酶C孵育时,谷氨酰胺酶完全失活。该酶还显示出一个非线性阿伦纽斯曲线,在24℃时出现断裂。膜无氧硫醇试剂汞酰和对氯汞苯磺酸不抑制冻融线粒体和有丝分裂体中的谷氨酰胺酶活性,但膜渗透剂N-乙基马来酰亚胺强烈抑制该酶。然而,当在有丝分裂体的基质侧或使用洗涤剂溶解的酶进行烷基化时,柳汞基和对氯汞苯基磺酸是有效的抑制剂。此外,只有在囊泡基质侧进行蛋白水解时,有丝分裂体的胰蛋白酶消化才能有效灭活谷氨酰胺酶。对亚线粒体颗粒制备过程中获得的可溶性和膜组分进行酶联免疫吸附分析,结果表明大多数酶是溶解的,但处于非活性状态。Triton X-114的相分离使大部分蛋白质处于水相。这些结果综合起来抛弃了蛋白质的跨膜定位,而它们与谷氨酰胺酶在线粒体内膜基质侧的锚定一致,酶的基质部分与其功能相关。

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