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.1997年1月;63(1-2):129-36.
doi:10.1016/s0166-0934(96)02121-0。

电穿孔法瞬时转染NB324K细胞提高重组AAV的产生

附属公司

电穿孔法瞬时转染NB324K细胞提高重组AAV的产生

F麦克斯韦等。 J Virol方法. 1997年1月.

摘要

腺相关病毒(AAV)是一种有效的基因转移整合载体。由于很难产生稳定的包装细胞系,AAV重组体通常通过瞬时共转染方法产生。通过优化瞬时共转染条件,可以获得可接受的转染重组体滴度。在这里,使用AAV感染质粒psub201的荧光素酶报告子衍生物,我们表明通过电穿孔而不是磷酸钙转染可以获得更高的转导病毒产量。此外,我们观察到NB324K细胞(一种SV40转化的人类细胞系)与辅助质粒pAAV/Ad电穿孔,伴随腺病毒dl309感染,产生的荧光素酶转导重组AAV的产量等于或优于从更常用的293细胞获得的产量。NB324K细胞更容易操作,重组病毒与细胞的结合增强(有利于其浓缩和纯化)。我们还采用了原位感染细胞杂交程序,使用地高辛标记探针,作为测定感染滴度的通用方法。由此估算的荧光素酶转导和碱性磷酸酶转导AAV载体的效价类似:后者的估算效价与碱性磷酸酶原位表达测定的效价一致。我们还描述了psub201的一个多克隆位点衍生物,它将有助于进一步生成AAV重组体。

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