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1996年4月5日;271(14):8472-80.
doi:10.1074/jbc.271.14.8472。

Raf-1激酶对磷脂酰丝氨酸和磷脂酸具有不同的结合域。磷脂酸调节12-O-十四烷基佛波醇-13-醋酸盐刺激Madin-Darby犬肾细胞中Raf-1的移位

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Raf-1激酶对磷脂酰丝氨酸和磷脂酸具有不同的结合域。磷脂酸调节12-O-十四烷酰基激素-13-乙酸酯刺激的Madin-Darby犬肾细胞中Raf-1的易位

S Ghosh公司等。 生物化学杂志
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摘要

先前的研究表明,Raf-1激酶富含半胱氨酸的氨基末端结构域与磷脂酰丝氨酸选择性相互作用(Ghosh,S.,Xie,W.Q.,Quest,A.F.G.,Mabrouk,G.M.,Strum,J.C.,and Bell,R.M.(1994)J.Biol。化学。269, 10000-10007). 进一步分析表明,全长Raf-1与磷脂酰丝氨酸和磷脂酸(PA)结合。具体来说,Raf-1激酶的羧基末端结构域(RafC;人类Raf-1的295 648个残基)与磷脂酸强烈相互作用。RafC与PA的结合表现出正合作性,Hill数介于3.3和6.2之间;表观Kd范围为4.9+/-0.6至7.8+/-0.9 mol%PA。RafC与PA的相互作用表现出不同于Raf-1富含半胱氨酸结构域与PA之间相互作用的pH依赖性。此外,在高离子强度下,RafC-PA相互作用不受影响。在所有测试的脂质中,只有PA和心磷脂表现出高亲和力结合;其他酸性脂质要么无效,要么无效。通过缺失突变,RafC中的PA结合位点被缩小到残基389和423之间的35个氨基酸段。RafC不结合磷脂酰醇;此外,通过1%乙醇处理抑制Madin-Darby犬肾细胞中PA的形成,在12-O-十四烷基佛波-13-乙酸酯刺激后,显著减少了Raf-1从胞浆到膜的转运。这些结果表明,脂质第二信使PA在体内调节Raf-1的易位和随后的激活中具有潜在作用。

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