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比较研究
.1993年1月5日;268(1):153-60.

酿酒酵母NAD依赖性5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因的克隆与鉴定

附属机构
  • PMID: 8416923
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酿酒酵母NAD依赖性5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因的克隆与鉴定

M G西部等。 生物化学杂志. .
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摘要

酿酒酵母具有一种单功能、胞质NAD依赖的5,10-亚甲基四氢叶酸(THF)脱氢酶,可将5,10-methylene-THF转化为5,10-methenyl-THF(Barlowe,C.K.,and Appling,D.R.(1990)《生物化学》29,7089-7094)。我们现在已经使用基于纯化蛋白内部肽序列的寡核苷酸探针从酵母基因组文库中分离出编码这种酶的基因。核苷酸序列分析揭示了一个包含两个内部肽序列的320氨基酸开放阅读框。预测的分子量(36236)与纯化蛋白的估计大小(33000-38000)一致。基因染色体拷贝的破坏导致NAD依赖性5,10-亚甲基-THF脱氢酶活性的丧失,并导致某些遗传背景中的嘌呤需求,证实了这种酶在细胞质单碳单位氧化中的作用。通过与酵母染色体杂交,将单个基因定位到第十一号染色体。我们建议将MTD1作为该基因的名称。对总酵母RNA的Northern分析显示,一个约1100个核苷酸的转录本。在翻译起始上游58到83个碱基对之间发现了多个转录起始位点。迄今为止克隆的其他七种亚甲基-THF脱氢酶的核酸序列衍生出的氨基酸序列被发现具有高度同源性。虽然预测的酵母NAD依赖酶的氨基酸序列与其他序列显示出轻微的同源性,但它似乎只与其他5,10-亚甲基-THF脱氢酶有遥远的联系。

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