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.1993年11月15日;268(32):24296-302.

胰岛素分泌细胞蛋白激酶C的一种非典型亚型PKC iota的分子克隆和鉴定

附属公司
  • PMID: 8226978
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胰岛素分泌细胞蛋白激酶C的一种非典型亚型PKC iota的分子克隆和鉴定

L A塞尔比等。 生物化学杂志. .
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摘要

丝氨酸-苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族包含至少八个成员。这些是差异表达的,对激活剂如Ca2+和脂质物种表现出不同的亲和力,因此被认为在调节分化、生长和分泌等细胞过程中发挥广泛作用。本研究的目的是确定胰岛素分泌细胞系RINm5F中新的PKC亚型,该亚型可能被伴随营养素刺激胰岛素释放的脂质代谢改变激活。来自RINm5F细胞mRNA的cDNA片段通过聚合酶链反应,使用与所有已知PKC催化结构域中高度保守区域相对应的简并寡核苷酸引物进行扩增。通过这种方法产生的新序列随后被用于筛选cDNA文库。新PKC亚型PKC-iota的整个587-氨基酸编码区是从从人类肾脏cDNA文库中分离的两个重叠克隆中推导出来的。PKC iota的氨基酸序列与PKC zeta的同源性最高,催化域的同源性从72%上升到84%。相比之下,PKC与其他亚型的同源性不太明显,即使在高度保守的催化区域,同源性也小于53%。PKC zeta和PKC iota之间的进一步相似之处包括高度保守的假底物序列,没有明显的Ca(2+)结合区域,并且只存在一个富含半胱氨酸的锌指状结构域。使用全长PKC iota克隆作为探针的Northern blot分析显示,一个4.6千碱基的转录物主要存在于肺和脑中,但在包括胰岛在内的许多组织中也表达较低水平。在人β-肌动蛋白启动子下稳定表达PKC-iota cDNA的CHO-K1细胞中,使用PKC zeta的COOH末端抗体(保存在PKC-ioda中)通过Western blotting检测到该蛋白为65-kDa带。转染CHO-K1细胞的提取物也显示出以髓磷脂碱性蛋白为底物的激酶活性显著增加。结果表明,PKC物群应包括在最终成员为PKC zeta的PKC非典型亚群中。因此,PKC不太可能被磷酸肌醇水解产生的二酰甘油激活,但可能是营养素刺激胰岛素分泌期间升高的新型脂质活化剂的靶点。

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