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比较研究
.1994年8月;71(2):219-25.

原位拖尾和缺口翻译技术联合应用区分细胞凋亡和坏死

附属公司
  • PMID: 8078301
比较研究

原位拖尾和缺口翻译技术联合应用区分细胞凋亡和坏死

R金等。 实验室投资. 1994年8月.

摘要

背景:最近发展了许多酶技术来检测细胞水平凋亡中的DNA片段。然而,由于细胞坏死也会发生DNA片段化,我们研究了DNA聚合酶(缺口翻译)或末端转移酶(拖尾)的使用在多大程度上可以区分凋亡典型的核小体间DNA降解和坏死中更随机的DNA破坏。

实验设计:我们在凋亡或坏死细胞死亡的体内和体外模型上比较了这些技术。γ射线诱导胸腺细胞凋亡,抗体和补体的细胞毒作用导致胸腺细胞坏死。以自体免疫性脑脊髓炎动物的石蜡包埋组织材料作为细胞凋亡模型,或以红藻氨酸诱导的神经细胞变性作为坏死模型,对体内细胞死亡进行检测。

结果:利用拖尾或缺口翻译技术将标记的核苷酸掺入受影响细胞的细胞核中,从而观察DNA片段。在体外细胞退化的早期阶段,凋亡细胞优先被尾标,而坏死细胞则通过缺口翻译鉴定。同样,体内早期坏死优先通过缺口翻译检测,而尾部对凋亡检测更为敏感。用这些酶技术得到的结果符合形态学标准对细胞死亡的评估。如果切片用蛋白酶K消化预处理,即使在多聚甲醛中长时间固定,这两种技术也可以应用于组织样品。

结论:我们的研究表明,原位缺口翻译和原位拖尾都有助于检测细胞悬浮液和组织切片中的DNA片段。这些技术可能有助于确定在实验条件下以及最终在人体组织中导致细胞死亡的分子机制。

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