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.1994年9月2日;269(35):22059-66.

5-脂氧合酶在未刺激大鼠嗜碱性白血病细胞核中的定位

附属公司
  • PMID: 8071328
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5-脂氧合酶在未刺激大鼠嗜碱性白血病细胞核中的定位

T G Brock公司等。 生物化学杂志. .
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摘要

5-脂氧合酶(5-LO)对花生四烯酸的代谢与该酶在彻底破坏的粒细胞中从可溶性部分转移到颗粒部分相一致。虽然免疫电子显微镜已经确定核膜是5-LO和5-LO激活蛋白(FLAP)在激活细胞中定位的位置,但该技术无法确定非刺激细胞中可溶性5-LO的位置。我们询问细胞核是否也可能是未刺激细胞中可溶性5-LO的位点,并利用大鼠嗜碱性白血病(RBL)细胞作为模型粒细胞细胞来解决这个问题。使用三种不同的技术破坏细胞,同时保持细胞核完整(轻度氮空化、Dounce均质化和去污剂溶解),免疫印迹分析表明分离细胞核中含有丰富的5-LO。在纯化的细胞核内,5-LO存在于两个池中:一个是在核破坏后容易释放的可溶性池,另一个是300 mM NaCl处理未去除的结合池。在所有病例中,5-LO也存在于细胞溶质和非核膜组分中。间接免疫荧光显微镜证实,大多数细胞核内存在丰富的5-LO,核外信号极少。然而,少数以浓缩染色质为特征的细胞没有显示出核相关染色,5-LO的细胞质染色增强。这表明,通过细胞分离发现的一些胞质5-LO是由这些分裂细胞引起的。当通过隔夜血清剥夺或分离含核细胞的细胞质将分裂细胞的贡献降至最低时,5-LO在核组分中显著,但在胞质组分中可忽略不计。与RBL细胞中的这种分布相反,通过免疫印迹和免疫荧光分析,5-LO在未刺激的人类中性粒细胞中主要是胞质的。在RBL细胞和人中性粒细胞中,FLAP定位于核膜和内质网。这些数据为5-LO在未刺激粒细胞中的定位提供了第一个证据。发现大量酶位于未刺激RBL细胞的细胞核内,这表明5-LO或其产物在细胞核内可能具有新的作用。

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