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.1994年9月27日;91(20):9228-32.
doi:10.1073/pnas.91.20.9228。

归一化cDNA文库的构建与表征

附属公司

归一化cDNA文库的构建与表征

M B苏亚雷斯等。 美国国家科学院程序. .

摘要

我们已经开发了一种基于再结合动力学的简单程序,该程序可以有效地减少代表单个mRNA物种的cDNA文库克隆之间的高丰度变化。为了进行标准化,我们使用了一个人类婴儿大脑cDNA库作为模型系统,这些cDNA被定向克隆到噬菌体载体中,因此可以很容易地转换为单链环。在控制引物延伸以在每个圆形模板上合成短互补链,在相对较低的C0t下熔化和再退火部分双工,以及羟基磷灰石柱色谱后,从流经部分中回收未结合的环,并电穿孔成细菌,传播规范化库而不需要子克隆步骤。对归一化程度的评估表明,从原始库中4个数量级丰度的极值范围来看,归一化库中检测到的任何克隆的出现频率仅在1个数量级的狭窄范围内。

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引用人

工具书类

    1. 核酸研究,1988年11月11日;16(21):9893-908-公共医学
    1. 《核酸研究》,1994年3月25日;22(6):987-92-公共医学
    1. 核酸研究1990年8月25日;18(16):4833-42-公共医学
    1. 《核酸研究》,1990年10月11日;18(19):5705-11-公共医学
    1. 分子生物学杂志。1990年10月5日;215(3):403-10-公共医学

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