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.1995年4月28日;270(17):9896-903。
doi:10.1074/jbc.270.17.9896。

在细胞溶质Ca2+浓度([Ca2+]c)的测量中转染的艾quorin。批判性评估

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在细胞溶质Ca2+浓度([Ca2+]c)的测量中转染的艾quorin。批判性评估

M布林尼等。 生物化学杂志. .
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摘要

靶向重组aequorins是迄今为止监测亚细胞器中[Ca2+]的最具体方法(Rizzuto,R.、Simpson,A.W.M.、Brini,M.和Pozzan,T.(1992)《自然》358、325-328;Brini,M.、Murgia,M.,Pasti,L.、Picard,D.、Pozzan,T.和Rizzuto,R.(1993)EMBO J.12,4813-4819;Kendall,J.M.、Dormer,R.L.和Campbell,A.K.(1992)《生物化学》。生物物理学。Res.Commun公司。189, 1008-1016). 然而,到目前为止,使用重组光蛋白测量哺乳动物细胞中细胞质中的[Ca2+]的研究还很少,细胞质中已经有有效的Ca2+探针。在这里,我们详细描述了这种方法,强调了在各种实验条件下使用重组细胞溶质绿原蛋白(cytAEQ)代替传统荧光指示剂的优点。我们证明cytAEQ在瞬时转染的细胞系和原代培养物以及稳定转染的克隆中以高水平重组表达,并且我们描述了一种将aequorin发光数据转换为[Ca2+]值的简单算法。我们表明,尽管通常细胞内浓度(50-100 microM)的荧光指示剂与[Ca2+]c瞬态的显著缓冲有关,但重组表达的aequorin的这个问题可以忽略不计。光蛋白的大动态范围也允许准确估计大[Ca2+]在某些细胞类型如神经元中观察到的c增加。最后,cytAEQ似乎是在共转染实验中测量[Ca2+]c的宝贵工具。特别是,我们表明,当与α1-肾上腺素能受体(结合生成肌醇1,4,5-三磷酸)共转染时,cytAEQ忠实地监测表达受体的细胞亚群,而在群体水平上,fura-2的信号主要由未转染细胞的信号控制。

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