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.1995年6月;6(3):343-51.
doi:10.1006/prep.1995.1045。

肿瘤谷氨酰胺酶纯化

附属公司

肿瘤谷氨酰胺酶纯化

J A塞古拉等。 蛋白质Expr纯化. 1995年6月.

摘要

开发了两种替代纯化方案,以从埃利希肿瘤细胞中获得高纯度形式的谷氨酰胺酶。一种实验方法是基于传统和高效液相色谱分馏技术,产生比先前报道的高37倍的纯化。该方法包括:线粒体分离、Triton X-100增溶、离子交换和羟基磷灰石色谱、硫酸铵沉淀和疏水作用色谱。利用天然聚丙烯酰胺凝胶电泳、原位活性染色和蛋白质带的电洗脱优化了第二个纯化程序。这种方法可以简单快速地分离出比以前纯度高10倍的谷氨酰胺酶,同时也将酶蛋白水解失活的可能性降至最低。通过凝胶过滤和蔗糖密度梯度超速离心法测定天然形式蛋白质的表观分子量。针对猪肾酶免疫纯化了针对Ehrlich谷氨酰胺酶的多克隆抗体。使用这些抗体以及抗大鼠肾脏谷氨酰胺酶抗体进行的免疫印迹分析显示,纯化酶的条带模式相同。

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