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.1995年12月1日;270(48):28982-8.
doi:10.1074/jbc.270.48.28982。

哺乳动物GTP结合蛋白新家族(RagA、RagBs、RagB1)的克隆

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哺乳动物GTP结合蛋白新家族(RagA、RagBs、RagB1)的克隆

A Schurmann先生等人。 生物化学杂志. .
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摘要

从大鼠和人类cDNA文库中分离出两个新的Ras相关GTP结合蛋白(RagA和RagB)的cDNA克隆。它们推导出的氨基酸序列包含六个已知保守GTP结合基序中的四个(PM1、-2、-3、G1),其余两个(G2、G3)与Ras家族的基序显著不同,以及一个可能与GTP结合无关的异常大的C末端结构域(100个氨基酸)。RagA和RagB的不同之处在于7个保守的氨基酸取代(98%的同一性),以及RagB N末端的33个额外残基。此外,发现RagB的两种亚型(RagBs和RagB1)的差异仅在于GTP结合基序PM2和PM3之间插入了28个密码子,这显然是由选择性mRNA剪接产生的。用特异性引物进行聚合酶链反应扩增表明,在肾上腺、胸腺、脾脏和肾脏中均存在长型和短型RagB转录物,而在大脑中仅检测到长型RagB1。未检测到RagA的长剪接变体。RagA和RagBs的重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以特定和可饱和的方式结合大量放射性标记的GTP-γ-S。相反,GST-RagB1的GTP-γ-S结合几乎没有超过重组GST。GTP-γ-S与重组RagA结合,RagBs可快速与GTP交换,但未检测到固有GTPase活性。多重序列比对表明,RagA和RagB不能归属于Ras-related GTPases的任何已知亚家族,但与可能参与磷酸盐转运和/或细胞生长的酵母蛋白(Gtr1)具有52%的同源性。据推测,RagA和RagB是Gtr1的哺乳动物同源物,它们代表Ras-homologous GTP结合蛋白的一个新亚家族。

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