Hybridization of denatured RNA and small DNA fragments transferred to nitrocellulose

doi:10.1073/pnas.77.9.5201

.1980年9月；77(9):5201-5.

doi:10.1073/pnas.77.9.5201。

变性RNA和转移到硝化纤维素的小DNA片段的杂交

P S托马斯

PMID： 6159641
预防性维修识别码： PMC350025型
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.77.9.5201

变性RNA和转移到硝化纤维素的小DNA片段的杂交

P S托马斯. 美国国家科学院程序. 1980年9月.

.1980年9月；77(9):5201-5.

doi:10.1073/pnas.77.9.5201。

作者

P S托马斯

PMID： 6159641
预防性维修识别码： PMC350025型
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.77.9.5201

摘要

建立了一种简单快速的方法，将琼脂糖凝胶中的RNA转移到硝酸纤维素纸上进行杂交。用乙二醛和50%（vol/vol）二甲基亚砜变性后，聚（A）+和核糖体RNA在高盐（3 M NaCl/0.3 M柠檬酸三钠）中高效转移到硝化纤维纸上。经甲基汞氢氧化物处理后，RNA也与硝化纤维素结合。该方法很敏感：用高比活性探针（10（8）cpm/微克）杂交后，每条带约50 pg的特异性mRNA很容易检测到。通过这一过程，RNA稳定地结合到硝化纤维纸上，允许去除杂交探针并重新杂交RNA印迹，而不会损失灵敏度。与使用活性纸（重氮苯甲氧基甲基纸）相比，使用硝酸纤维素纸通过杂交分析RNA具有一些优势。该方法简单、廉价、重复性好、灵敏度高。此外，用乙二醛和二甲基亚砜变性DNA可促进小DNA（100个核苷酸或更大）向硝化纤维纸的转移和保留。还描述了一种将RNA和DNA直接点滴到经高浓度盐处理的硝化纤维纸上的相关方法；在这些条件下，少于200个核苷酸的变性DNA被保留并有效杂交。

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