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.1988年3月;170(3):1245-53.
doi:10.1128/jb.170.3.1245-1253.1988。

ompT编码大肠杆菌外膜蛋白酶,在纯化过程中裂解T7 RNA聚合酶

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ompT编码大肠杆菌外膜蛋白酶,在纯化过程中裂解T7 RNA聚合酶

J格罗德伯格等。 细菌杂志. 1988年3月.

摘要

噬菌体T7 RNA聚合酶在大肠杆菌中是稳定的,但在细胞裂解后很容易被至少一种内蛋白酶切割。这种内蛋白酶活性的主要来源被发现位于细胞的外膜。开发了一种快速全细胞测定法来筛选不同菌株是否存在这种蛋白水解活性。通过该试验,我们鉴定了一些完全缺乏蛋白酶的普通实验室菌株。对这些无效菌株的遗传和Southern分析使我们得出结论,裂解T7 RNA聚合酶的蛋白酶是OmpT(以前称为蛋白a),这是一种已知的外膜内蛋白酶,无效表型是由OmpT结构基因的缺失造成的。携带ompT基因的重组质粒使这些缺失菌株能够合成ompT并将其转化为蛋白酶阳性表型。该质粒导致我们使用的大肠杆菌K-12和B菌株中OmpT蛋白和蛋白酶活性的过度生产,但在大肠杆菌C菌株C1757中仅弱表达。根据envZ对ompT合成的已知影响,研究了ompT表达的这种应变依赖性差异。质粒ompT区的一个小缺失会大大减少外膜中ompT蛋白和质粒编码蛋白酶的数量。利用ompT缺失菌株从克隆基因中产生T7 RNA聚合酶,已对完整的T7 RNA多聚酶常规进行了纯化。这些菌株可能有助于纯化大肠杆菌中表达的其他蛋白质。

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引用人

参考文献

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    1. 《核酸研究》1987年3月25日;15(6):2653-64-公共医学
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    1. 病毒学。1969年11月;39(3):562-74-公共医学
    1. 自然。1970年10月17日;228(5268):227-31-公共医学

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