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.2020年4月;21(4):1819-1832.
doi:10.3892/mmr.2020.10983。 Epub 2020年2月12日。

黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调节上皮-间质转化抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭

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黄芪多糖通过Wnt/β‑catenin信号通路调节上皮-间充质转化抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭

朔阳等。 分子医学代表. 2020年4月.

摘要

上皮间充质转化(EMT)在肿瘤迁移和侵袭中发挥着重要作用。黄芪多糖(APS)是中药黄芪的主要成分,已被证实具有抗肿瘤作用。然而,APS在乳腺癌转移和侵袭过程中的作用和机制尚不完全清楚。本研究探讨APS是否通过调节EMT通路抑制乳腺癌的迁移和侵袭。MTT试验和Ki67免疫荧光染色试验表明,APS抑制乳腺癌细胞的增殖。伤口愈合和Transwell Matrigel侵袭试验结果表明,APS降低了乳腺癌细胞的迁移和侵袭。western blotting和免疫荧光分析进一步证明APS对EMT相关分子具有调节作用。APS降低了蜗牛和波形蛋白的表达水平,但增加了E‑钙粘蛋白的表达。APS还下调Wnt1、β‑catenin和下游靶点表达。此外,本研究结果表明,APS通过抑制Wnt/β‑catenin信号通路,降低了细胞增殖以及EMT介导的细胞迁移和侵袭。本研究表明APS可能是一种很有前途的乳腺癌治疗剂。

关键词:乳腺癌;转移;上皮-间充质转化;Wnt/β-catenin途径;黄芪多糖。

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数字

图1。
图1。
APS对乳腺癌细胞增殖的影响。使用MTT法测定(A)MCF-7和(B)MDA-MB-231细胞的增殖**与对照组相比,P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图2。
图2。
Ki67的免疫荧光染色。(A) 使用抗Ki67抗体对MCF-7和MDA-MB-231细胞进行免疫荧光染色,并(B)定量。放大倍数,×400**与对照组相比,P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图3。
图3。
APS抑制乳腺癌细胞的迁移。(A) 刮除MCF-7和MDA-MB-231细胞,然后用不同浓度的APS孵育。在添加APS后的0和24小时采集图像。放大倍数,×100。(B) 细胞迁移的定量分析,以对照组的百分比表示(0µg/ml)**与对照组相比P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图4。
图4。
APS抑制乳腺癌细胞的侵袭。(A) 用不同浓度的APS处理MCF-7和MDA-MB-231细胞24小时。用Transwell Matrigel侵袭试验测定侵袭能力。放大倍数,×200。(B) 细胞侵袭的定量分析,以对照组的百分比表示(0µg/ml)**与对照组相比,P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图5。
图5。
APS改变Wnt1、β-catenin和EMT相关分子的表达。采用逆转录定量PCR评估(A)蜗牛、波形蛋白、E-cadherin、(B)Wnt1和β-catenin的mRNA表达水平。(C) Western blotting检测Wnt、β-catenin和EMT相关分子的蛋白表达水平。定量(D)蜗牛、波形蛋白、E-cadherin、(E)Wnt1和β-catenin的蛋白表达水平*与相应对照组相比,P<0.05和**P<0.01。APS、,黄芪属多糖;EMT,上皮-间充质转化。
图6。
图6。
E-cadherin免疫荧光染色。(A)使用抗E-cadherin抗体对MCF-7和MDA-MB-231细胞进行免疫荧光染色,(B)定量。放大倍数,×400.*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图7。
图7。
APS降低细胞质和细胞核中β-catenin的表达。细胞质和核β-连环蛋白的蛋白表达水平(A)通过western blotting测定,(B)定量*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图8。
图8。
APS降低c-Myc和Cyclin D1的表达。(A) 使用逆转录定量PCR评估c-Myc和Cyclin D1的mRNA水平。细胞周期蛋白D1和c-Myc的蛋白表达水平通过western blotting(B)测定,(c)定量*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01。APS、,黄芪属多糖。
图9。
图9。
氯化锂逆转APS对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。用LiCl(10 mM)和800µg/ml APS培养MCF-7和MDA-MB-231细胞。β-catenin、蜗牛、波形蛋白、E-cadherin、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平(A)通过western blotting测定,(B)定量*与相应对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05和##与APS组相比,P<0.01。氯化锂、氯化锂;APS、,黄芪属多糖;CON,控制。

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