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。2020年3月23日20:89。
doi:10.1186/s12935-020-1130-5。 eCollection 2020。

FTX通过靶向miR-335-5p/NUCB2轴促进肺腺癌的细胞增殖和迁移

霍晓东 # 1, 王慧星 # 2, Bin Huo先生 1, 王磊（Lei Wang） 1, 郭洋 三, 王金环 1, 王丽丽（Lili Wang） 1, 王海涛 1
附属公司

FTX通过靶向miR-335-5p/NUCB2轴促进肺腺癌细胞增殖和迁移

霍晓东等。 癌细胞Int。 。

摘要

背景：大量研究表明，长非编码RNA（lncRNAs）可能在包括肺腺癌（LUAD）在内的肿瘤中起调节作用。据报道，LncRNA FTX转录物XIST调节器（FTX）可以调节一些癌症的生物学行为。然而，其功能作用和分子机制在LUAD中仍不清楚。我们目前的研究集中于探索FTX在LUAD中的生物学功能。

方法：RT-qPCR检测FTX、miR-335-5p或NUCB2在LUAD细胞中的表达。通过集落形成、EdU、流式细胞术、TUNEL、transwell和western blot分析研究FTX对LUAD进展的影响。荧光素酶报告分析证实了microRNA-335-5p（miR-335-5p）与FTX或核结合蛋白2（NUCB2）之间的相互作用。

结果：RT-qPCR显示，在LUAD细胞系中FTX表达上调。功能丧失实验表明，FTX能加速LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡。此外，在LUAD细胞中低表达的miR-335-5p被FTX海绵化。随后，NUCB2被鉴定为miR-335-5p的靶基因。此外，已证实NUCB2在LUAD中作为癌基因发挥作用。救援试验表明，受FTX敲除抑制的LUAD进展可以通过NUCB2上调而恢复。

结论：FTX在LUAD中发挥致癌作用，并通过靶向miR-335-5p/NUCB2轴促进肿瘤发展。

关键词：FTX；肺腺癌；NUCB2；miR-335-5便士。

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利益冲突声明

竞争性利益作者声明他们没有竞争性利益。

数字

图1
图1
FTX过度表达，增强了LUAD的进展。一FTX在LUAD细胞系和BEAS-2B细胞系中的表达。b条通过RT-qPCR测定FTX在H1650和H1975中的敲除效果。c（c）,d日通过集落形成和EdU分析评估FTX缺失的LUAD细胞的增殖。电子,（f）流式细胞术分析和TUNEL分析用于评估FTX敲除下的细胞凋亡。克,小时通过transwell法分析FTX沉默后LUAD细胞的迁移和侵袭。我Western blot用于评估sh-FTX或sh-NC转染细胞中EMT相关蛋白的水平。**p<0.01
图2
图2
在LUAD中FTX海绵miR-335-5p。一FISH法显示FTX在LUAD细胞中的位置。b条RNA下拉分析检测了FTX和预测的miRNAs之间的相互作用。c（c）FTX和miR-335-5p之间的结合位点。d日RT-qPCR检测LUAD细胞株和BEAS-2B细胞株中MiR-335-5p的表达。电子在sh-FTX转染的LUAD细胞中检测到MiR-335-5p的表达。（f）在H1650和H1975细胞中检测MiR-335-5p上调效率。克测试miR-335-5p模拟物对FTX表达的影响。小时在转染miR-335-5p模拟物或NC模拟物的LUAD细胞中测量FTX-WT/Mut报告子的荧光素酶活性**p<0.01，N.S.无显著性
图3
图3
MiR-335-5p下调恢复了FTX敲除对LUAD细胞的影响。一在H1650和H1975细胞中测定miR-335-5p抑制剂的转染效率。b条,c（c）通过集落形成测定和EdU测定证实了用sh NC、sh FTX、sh FTX+miR-335-5p抑制剂转染的LUAD细胞中的增殖。d日,电子采用流式细胞仪分析和TUNEL法分析sh-FTX sh-FTX+miR-335-5p抑制剂或sh-NC组的细胞凋亡。（f）,克Transwell分析评估了转染指定质粒的细胞的迁移和侵袭能力。小时Western blot检测各组EMT相关蛋白水平**p<0.01
图4
图4
NUCB2是miR-335-5p的靶点，在LUAD中充当癌基因。一通过RT-qPCR验证miR-335-5p模拟物对预测mRNA表达的影响。b条预测MiR-335-5p在NUCB2上具有结合位点。c（c）在LUAD细胞系中评估NUCB2的表达，并将BEAS-2B细胞系视为对照。d日RIP分析证实了RISC中FTX、miR-335-5p和NUCB2的富集。电子NUCB2-WT/Mut对所示质粒的荧光素酶活性通过荧光素素酶报告分析进行了验证。（f）NUCB2在H1650和H1975细胞中的击倒效果。克,小时通过集落形成和EdU分析评估sh-NUCB2或sh-NC对LUAD细胞增殖的影响。我,j个采用流式细胞术和TUNEL法检测sh-NUCB2和sh-NC组细胞凋亡。k个,我采用Transwell法检测sh-NUCB2或sh-NC组的细胞迁移和侵袭。米Western blot检测sh-NUCB2或sh-NC组EMT相关蛋白水平**p<0.01
图5
图5
FTX通过增加NUCB2表达促进LUAD进展。一用RT-qPCR验证pcDNA3.1/NUCB2的转染效率。b条,c（c）各组均证实LUAD细胞增殖。d日,电子检测指定质粒转染细胞的凋亡情况。（f）,克评估转染指定质粒的细胞的迁移和侵袭。小时通过转染指定质粒检测EMT相关蛋白水平**p<0.01
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